高效液相色谱法对川贝母中的生物碱成分含量测定.docVIP

精品论文 参考文献 高效液相色谱法对川贝母中的生物碱成分含量测定 张秀莉1 张琦2 　　（1吉林省白山市江源区石人镇中心卫生院 134707） 　　（2吉林省白山市江源区江源社区卫生服务中心 134700） 　　【摘要】目的 建立川贝母生物碱含量的高效液相色谱检测方法并探讨其临床应用。方法　采用HPLC-ELSD法检测川贝母的生物碱含量，流动相为乙腈:水: NH4HCO3，结果　贝母甲素在1.05-3.78 mu;g范围内与峰面积线性关系良好，样品回收率为99.12%，RSD为1.37%，贝母乙素在0.87-4.12mu;g范围内与峰面积线性关系良好，样品回收率为98.27%，RSD为1.19%。结论　HPLC-ELSD法检测川贝母的两种生物碱含量灵敏度高、专属性强、线性关系良好，适用于川贝母的生物碱测定及质量控制。 　　【关键词】川贝母 生物碱 高效液相色谱法 含量测定 　　【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）31-0113-02 　　川贝母是贝母家族中按照产地分类的专有名词，野生川贝母主要生长于海拔3000米以上的高寒地区，生长地土壤一般较湿润，现今主要分布于四川西南部、云南西北部和西藏南部等地区，受生长环境限制其产量较低，是润肺止咳的名贵中药材，其不仅具有良好的止咳化痰功效，而且能养肺阴、宣肺、润肺而清肺热，因此常用于治疗急性气管炎、支气管炎、肺结核等病症[1]；川贝母的主要有效成为为贝母类生物碱，此类生物碱多为异甾体生物碱，无明显的紫外吸收，为此检测此类生物碱多采用波层色谱或是柱前衍生高效液相色谱法，本文将HPLC-ELSD法用于检测川贝母的生物碱含量，取得了满意的效果，现报告如下： 　　1 材料与方法 　　1.1仪器与试剂 采用岛津LC-2900型高效液相色谱仪，联合ELSD检测器，流动相为乙腈-水-NH4HCO3，用浓氨水将流动相pH调至10.0-11.0之间，流速控制在0.8-1.0ml/min，温度控制在40℃左右，每次进样10mu;l，检测器漂移温度控制在90℃，N2压力控制在0.12MPa，乙腈、碳酸氢钠、浓氨水等均购自上海化学试剂有限公司，均为分析纯，贝母甲素及贝母乙素购自中国药品生物制品检定所，贝母甲素的批号为201210289，贝母乙素的批号为201205664，川贝母药材购自亳州中药材市场。 　　1.2样品及对照品溶液制备 取适量川贝母干燥粉末过80目筛，精密称取2g后加氨水80ml，氨水浸泡60min后，加入50ml氯仿80℃水浴回流3h，滤过取25ml后挥干，过滤所得残渣用氯仿5ml溶解后过滤，将过滤液再次挥干后一并加入容量瓶中，加入5ml氯仿溶解备用。精密称取贝母甲素和贝母乙素对照品，加氯仿制成每1ml含0.300mg贝母甲素和0.400mg贝母乙素的对照品溶液。 　　1.3检测方法 取贝母甲素和贝母乙素对照品溶液建立标准曲线，并获得线性关系良好的回归方程，随后进行稳定性、重复性、精密性及加样回收率实验，进行系统适应性和方法学考察。 　　2 结果 　　2.1线性关系考察 精密称取贝母甲素和贝母乙素的对照品，加氯仿制成每1ml含0.300 mg贝母甲素和0.400mg贝母乙素的对照品溶液。对照品溶液按照5、10、15mu;l依次递增进样，采用外标法对两种生物碱对照品峰面积(y)与进样量(x)做线性回归处理，得回归方程见表1。 　　表1两种生物碱线性回归方程 　　2.2重现性和精密度试验 取样品溶液按照10mu;l进样，贝母甲素的含量为0.0316%，RSD为1.32%，贝母乙素的含量为0.0146%，RSD为1.71%；取对照品溶液每次进样10mu;l，重复进样5次，贝母甲素峰面积积分值RSD为1.29%，贝母乙素的峰面积积分值RSD为1.56%；由此可见，HPLC-ELSD法检测川贝母的贝母甲素和贝母乙素的重现性和精密度良好。 　　2.3回收率实验 精密称取已知含贝母甲素0.0316%和贝母乙素0.0146%的样品溶液，加入含贝母甲素1.0mg/ml和贝母乙素1.5mg/ml的对照品溶液，将对照品和样品溶液混匀后进样10mu;l，检测含量并计算回收率，贝母甲素的回收率为99.12%，RSD为1.37%，贝母乙素的回收率为98.27%，RSD为1.19%。 　　3 讨论 　　川贝母中主要的有效成为为生物碱，其中最为常见的为贝母甲素和贝母乙素，以上两种生物碱均为异甾体生物碱，紫外吸收不明显，传统的紫外检测器造成的误差大，因此要检测川贝母中生物碱含量多采用波层色谱法，或是柱前衍生高效液相色谱法，薄层色谱法检测精度不足，柱前