高效液相色谱法测定人工虫草中腺苷和腺嘌呤的含量.docVIP

精品论文 参考文献 高效液相色谱法测定人工虫草中腺苷和腺嘌呤的含量 （ 1.新疆医科大学第一附属医院肾病科新疆乌鲁木齐 830011 ；2.第六师奇台医院药剂科.新疆乌鲁木齐 830011；3. 新疆工程学院 新疆乌鲁木齐 830011） 课题项目：新疆布鲁氏菌病传播机理的动力学模型和疾病预防控制研究；基金号：XJEDU2013S44 摘要：目的：建立HPLC法测定虫草中的腺苷和腺嘌呤的方法。方法:采用高效液相法，Kromasil C18色谱柱(4.6 x 150mm,5micro;m)，流动相为1%乙酸甲醇-乙腈(V/V)，流速0.9ml.min-1,检测波长为2600nm。结果:腺嘌呤在0.59-1.18 mg/mL（r=0.9998）范围内峰面积与浓度呈良好线性关系，平均加样回收率为97.5%，RSD=2.32%（n=6），腺苷在1.47-2.94mg/mL（r=0.9998）范围内峰面积与浓度呈良好线性关系, 平均加样回收率为96.5%，RSD=1.37%（n=6）,结论:该方法操作简便、灵敏度高、重现性好、专属性强，适用于人工虫草腺苷及腺嘌呤含量的测定。为人工虫草在临床医学应用及新药开发提供了基础研究数据。 关键词: 高效液相色谱法；虫草；腺苷；腺嘌呤；含量 [中图分类号] R-33 [文献标识码] A 文章编号： 冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌 Cordyceps sinensis (Berk) Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体[1],为我国传统名贵中药材,主产于西藏、青海的高寒草甸。近年来,由于对野生冬虫夏草的过度采挖,导致虫草资源逐渐枯竭,人工虫草的培育研究应运而生。人工北虫草又称北冬虫夏草、蛹虫草(Cordyceps militaris),是从天然北虫草分离得到的菌种拟青霉(Paecilomyces militaris)经人工培养所获得的子实体,与冬虫夏草同属异种。据报道人工发酵的菌丝体产物，其化学成分与天然虫草基本相似[2]。中国药典2005年版把腺苷作为冬虫夏草的定量指标[3].已有一些文献报道使用HPLC方法测定虫草中核苷类成分[4-6]。 为了考察人工虫草菌粉的质量，本实验应用HPLC，在相同色谱条件下测定人工虫草菌粉中腺苷和腺嘌呤的含量。 1.仪器与试剂 1.1 仪器 LC-6A高效液相色谱仪；SPD-20A型紫外检测器；CBM-20A色谱工作站 (日本岛津公司)。XS105型十万分之一电子天平（梅特勒-托利多）；AL204型万分之一电子天平（梅特勒-托利多）；KQ-200KDE型高功率数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Direct-Q3超纯水仪(美国密理博公司)；DZF_6021型真空干燥箱(上海精密试验设备有限公司)；智能恒温电热套（郑州长城科工贸有限公司）。 1.2 试剂与样品 腺苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号:100080—200707）；乙腈（色谱纯,飞世尔实验器材有限公司)；实验用水均为超纯水, 人工虫草发酵菌粉(由江西济民可信金水宝制药有限公司提供) 2.方法与结果 2.1 色谱条件 检测波长260nm，流速：0.9ml.min-1.色谱柱:Kromasil C18:(4.6times;150mm, 5micro;m) ；流动相:A=磷酸缓冲液,B=乙腈；梯度洗脱程序为：0-4min,流动相流动相A从93%线性减至87%，4-6min，流动相A为87%。 图1 虫草色谱图 图2 腺苷腺嘌呤对照品色谱图 2.2 对照品制备 精密称取腺苷准品8.3 mg，以甲醇定容于10 mL容量瓶中，配成浓度为0.83 mg/mL的对照品溶液，精密称取腺嘌呤4.0 mg, 以甲醇定容于10 mL容量瓶中, 配成浓度为0.4mg /mL的对照品溶液，过0.45mu;m微孔滤膜。取腺嘌呤80 L,腺苷200 L，加入甲醇400 L混合均匀。 2.3 样品溶液制备 精密称取虫草粉末3.0000 g于锥形瓶中，加入甲醇30 mL，超声处理（功率150 W，频率60 HZ）40 min，过滤后残渣加入甲醇30ml，相同条件超声40 min，合并两次滤液浓缩至25 mL，过0.45mu;m微孔滤膜，备用。 2.4 标准曲线绘制 吸取标准品溶液5.0，6.0，7.0,8.0,9.0,10.0 micro;l进样，按上述色谱条件测定峰面积，以浓度x为横坐标, 峰面积y为