高效液相色谱法测定软饮料中香兰素和乙基香兰素.docVIP

精品论文 参考文献 高效液相色谱法测定软饮料中香兰素和乙基香兰素 罗杰 梁佳易 李翠娟 　　石药集团欧意药业有限公司 河北 050000 　　摘要：目的 通过高效液相色谱法检测方法，来测定软饮料中香兰素和乙基香兰素。方法 在酸性条件下，通过乙腈来提取样品中的香兰素和乙基香兰素，利用盐析作用进行分层净化，配置出标准的混合溶液以备用，用以液相色谱检测。检测波长308nm，外标法定量。结果 香兰素和乙基香兰素在0.5-50.0g/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.9999。添加水平为5、30、63mg/kg时，香兰素和乙基香兰素的平均回收率分别为98.4%和100.4%，96.7%和100.2%，97.8%和100.3%，相对标准偏差在3.53%~4.70%，检出限均为0.5mg/kg。结论 高效液相色谱法检测方法经济实用，适用性比较强，结果准确可靠，能够用于样品批量快速检测。 　　关键词：高效液相色谱法；香兰素；乙基香兰素 　　一、一般资料与方法 　　1、仪器与试剂 　　1.1仪器 　　Agilent1260系列高效液相色谱仪（美国Agilent公司），配有脱气机、四元泵、高效自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器（diodearraydetector，DAD）；电子天平（德国Sartorius公司）；氮吹仪（美国Organomation公司）；涡旋混匀器（德国IKA公司）；离心机（美国Sigma公司）；超纯水仪（美国Millipore公司）。 　　1.2试剂 　　乙腈（色谱纯，德国Merck公司）；甲酸（色谱纯，天津科密欧）；氯化钠、乙酸锌（分析纯，天津科密欧）；海砂（粒度0.65~0.85mm，国药试剂）；水为去离子水。香兰素（纯度＞98.0%）购自上海梯希爱化成工发展有限公司，乙基香兰素（纯度＞99%）购自百灵威科技有限公司。 　　2、方法 　　2.1标准溶液的配制 　　标准储备液：分别称取香兰素和乙基香兰素标准物质约50mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加乙腈溶解，加甲酸2滴，摇匀，继续用乙腈稀释，定容至刻度，摇匀，得浓度为2mg/mL的标准储备溶液。避光，?4℃冷藏保存，有效期6个月。混合标准中间液：分别准确移取香兰素和乙基香兰素标准溶液适量，置50mL容量瓶中，加乙腈0.1%甲酸水溶液（1：1，v：v）稀释，定容至刻度，摇匀，得浓度为50?g/mL的混合标准中间液。避光，?4℃冷藏保存，有效期3个月。 　　混合标准工作液：分别移取适量混合标准中间液，乙腈-0.1%甲酸水溶液（1：1，v：v）稀释，制成浓度为0.5、1.0、5.0、10、20、40、50?g/mL的系列标准工作液。临用前现配。 　　2.2色谱条件 　　色谱柱：InertsilODS-3（250mmtimes;4.6mm，5?m）；流动相：乙腈-1permil;甲酸梯度洗脱，流速1.2mL/min；检测波长：308nm；柱温：25℃；进样量：20?L。 　　2.3样品提取与净化 　　2.3.1液态软饮料 　　准确称取1g样品，置50mL离心管中，加0.1%甲酸水溶液1mL，海砂约1.5g，轻轻涡旋使样品混合均匀。准确加入乙腈5mL，含乳或蛋白质类样品加饱和乙酸锌溶液0.1mL，涡旋提取。加入氯化钠约2g，充分涡旋约2min，8000r/min离心5min。取上清液1mL置玻璃离心管中，40℃水浴中氮气吹干，加1mL流动相定容，涡旋溶解残渣。提取液经微孔滤膜过滤后，供高效液相色谱测定。乳和乳饮料按此步骤处理。 　　2.3.2固体饮料 　　准确称取0.5g样品，置50mL离心管中，加0.1%甲酸水溶液1mL，海砂约1.5g，轻轻振摇，充分浸润样品。加入准确5mL乙腈，氯化钠约2g，充分涡旋约2min，8000r/min离心5min。取上清液1mL置玻璃离心管中，40℃水浴中氮气吹干，加1mL流动相定容，涡旋溶解残渣。提取液经微孔滤膜过滤后，供高效液相色谱测定。 　　二、结果与讨论 　　1、检测波长的选择 　　利用二极管阵列检测器紫外全扫描显示，香兰素和乙基香兰素的?max均为278nm，其次为308nm；实际样品检测显示，检测波长为278nm时，在目标峰附近部分样品存在干扰，而308nm的谱图干扰少，且吸收强度与lambda;max相差不多，因此检测波长定为308nm，278nm谱图为辅助判别。 　　2、流动相的选择 　　香兰素和乙基香兰素在C18色谱柱上有较好的保留，流动相选洗脱能力较强的乙腈。分别考察了乙腈-水和乙腈-0.1%甲酸流动相体系，实验显示在相同洗脱条件下，当水相含有酸时，色谱峰峰形好、响应值高，分离度好，达到完全分；当水相中不加酸时，色谱峰峰宽较大、响应值相对低，分离度虽满足检测但香兰素色谱峰拖尾。香兰素和乙基香兰素结构中