14免疫学部分2017.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * Study Guide Can you describe the major regions of an immunoglobulin molecule? What distinguishes the immunoglobulin classes from one another? What is shared between classes? What is the significance of the variable regions? What is the significance of the Fab, the Fc, disulfide linkages? 重链区：每条约有450-550个氨基酸残基，相对分子量50-70KD。根据重链分为5种。 轻链：每条214个氨基酸残基，相对分子量25KD。以二硫键相连。每个Ig分子的两条轻链完全相同。 可变区：N端重链1/4和轻链1/2 组成，AA的种类、排列顺序与构型变化很大。 VL ，VH区各存在3个超变区（HVR1~3) ，共同组成Ig 的抗原识别部位，形成与抗原决定基 互补的表位。超变区也称互补决定区（complementarity- determining region, CD1~3)。 4个骨架区（framework region, FR1~4). AA替换频率较低 的的部分。 恒定区：C端重链3/4和轻链1/2 组成，AA的种类、排列顺序及构型相对稳定 重链、轻链C区分别称，CH、CL。CL长度基本一致，不同Ig的CH长度不一，如CH1－3，CH1－4。 Ig C区与抗体的生物学效应相关，如，激活补体，穿过胎盘和粘膜屏障，结合细胞表面Fc受体介导调理作用 ，介导ADCC作用和I型超敏反应。 铰链区：该区含脯氨酸，延展性、柔曲性好，可转动，有弹性的区域。 30个残基构成。由2－5个二硫键、CH1尾/CH2头部小段肽链构成。 对蛋白酶敏感，易被水解。 * 对流免疫电泳法 火箭电泳法 免疫荧光抗体技术 免疫荧光抗体技术是先用荧光染料标记抗体后用于检测抗原或抗体复合物的方法。常用的荧光染料有异硫氰酸荧光黄（FITC，黄绿色荧光）和罗丹明B（rhodamin B，发红色荧光）等。用已知种类的荧光抗体浸染待检的含有抗原的细胞或组织切片，如有相应抗原存在，则抗原即与此种抗体发生特异性结合，形成复合物而粘着在细胞上，不易洗脱，在荧光显微镜下成为发出荧光的可见物，可达到诊断或定位的目的。 具有灵敏度高、特异性强和操作简便等特点，适用于含量低或难于纯化分离的抗原，以及细胞和组织中抗原的原位检测等。 1）直接法。将已知种类的荧光抗体加到待检标本上，作用半小时后，用缓冲液冲洗，将未结合的荧光抗体全部洗去，干燥后在荧光显微镜下观察，如发现荧光表明标本中有相应抗原存在，是为阳性。此法的优点是特异性高，可应用于早期检查病原，如细菌、病毒等，缺点是每检查一种抗原，必须制备与其相应的荧光抗体。 2）间接法。先使未标记的已知抗体与待检抗原作用，如待检抗原与已知抗体相对应，即发生特异性结合成复合物，再加入荧光标记的抗免疫球蛋白（或称抗抗体，能与抗体结合），由于抗抗体与抗原抗体复合物中的抗体相结合，在荧光显微镜下即能见到荧光，是为阳性。 酶联免疫吸附法（ELISA） 先用酶标记抗原或抗体，并以酶对底物的反应来指示抗体或抗原反应特异性的方法。常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶。 具有特异性强、灵敏度高、简便快速而又不需要特殊的仪器，广泛用于临床诊断疾病和免疫学研究中。 酶标免疫检测原理 单克隆抗体技术 高等动物体内存在一系列能与各类抗原成分进行免疫反应的淋巴细胞系，一个特定的免疫淋巴细胞只能与一种对应的抗原决定簇相结合，并转化为致敏淋巴细胞或浆细胞，以产生细胞免疫反应或针对该抗原决定簇的特异性抗体。一个单细胞分裂形成的细胞纯系称为克隆（clone），由一个免疫浆细胞克隆产生的抗体称为单克隆抗体（monoclonal antibody, McAb）。 多克隆抗体（polyclonal antibody） 1. 定义：抗原分子通常具有多个抗原决定簇，动物免疫后可刺激多种具有相应抗原受体的B细胞发生免疫应答，因而可产生多种针对不同抗原决定簇的抗体。这些由不同B细胞克隆产生的抗体称为多克隆抗体（polycolonal antibody, PcAb）。 2. 实际意义 （1）预防、治疗感染性疾病（特异性差，可发生超 敏反应） （2）临床诊断 单克隆抗体（monoclonal antibody, McAb）