第八章 霉菌毒素检验PPT.ppt

;课后复习;第九章 食品中真菌毒素检验;霉菌产毒的特点;常见霉菌和霉菌毒素名称;1.2 霉菌毒素的命名及分类;1.3 霉菌毒素的产生条件;1.3 霉菌毒素的产生条件;霉菌污染食品质量的评定及食品卫生意义 ;1.4 毒性与危害;第二节 黄曲霉毒素的检验;2.1 概述;天然食品中常检出AFTB1、AFTB2、AFTG1、AFTG2、AFTM1。 从结构上看，可把它们分成两大类：即B族和G族，从B族和G族又派生出许多衍生物。所谓B族和G族的来源是在研究AFT初期，用氧化铝板作薄层板，在紫外光照射下，可观察到一些物质发蓝色荧光(blue)，称为B族；另一些物质发绿色荧光(green) 称为G族。;;主要来源：主要是黄曲霉（Aspergillus flavus部分产毒） 、寄生曲霉(Aspergillus parasitlas 所有菌株产毒)等代谢产物。AFT主要污染粮油及其制品，如花生、花生油、玉米、大米、棉子等。此外，在核桃、乳及乳制品、干辣椒中也有发现AFT的污染。 常检出AFTB1，奶和奶制品中易检出AFTM1。 在我国，产生黄曲霉毒素的菌种主要是黄曲霉，一般湿热地区产毒株多、产毒量大。;黄曲霉菌丝状菌落;毒性与危害：是一类毒性很大的物质，对动物能造成急性中毒，其毒性是氰化钾10倍；还能引起慢性中毒和致癌、致畸、致突变。其慢性中毒的主要表现是动物生长发生障碍，肝脏出现亚急性或慢性损伤AFT是目前发现的最强的化学致癌物质。比二甲基亚硝胺诱发肝癌的能力大75倍，所以，世界卫生组织(WHO)在确定重点研究的毒物中，AFT被列在首位。其作用部位主要是肝脏。 AFTB1在动物体内经羟化反应生成两种主要代谢产物AFTM1和AFTQ。前者与AFTB1的毒性和致癌性近似。牛饲料、牛奶。 ;名称 ;慢性毒性;性别;AFT 对人类毒性;国家;卫生标准：污染食品的主要是AFTB1、B2、Gl 、 G2、 M1等，其中尤以AFTB1最为重要。世界卫生组织的粮农组织(FA0／WHO)规定食品中AFTB1不得超15ppb；美国不得超过25ppb；日本规定不得超过10ppb；以色列和瑞典规定不得检出。我国对各种主要食品中AFT B1允许含量是：玉米、花生仁、花生油及其制品不得超过20ppb；大米和其他食用油不得超过10ppb；其他粮食、豆类、发酵食品不得超过5ppb；婴儿代乳品不得检出。;预防措施 ;二、霉菌毒素的检测 黄曲霉毒素??检测 我国涉及黄曲霉毒素的限量及检测的国家标准有 GB 2761—1981(食品中黄曲霉毒素B1允许量标准)、 GB 9676--1988(牛乳及其制品中黄曲霉毒索M，限量卫生标准)、 GB／T 17480--1998(酶联免疫吸附法测定饲料中黄曲霉毒素B1)、 GB／T 5009．22--1996[薄层色谱法(第一法)／ELISA(第二法)测定食品中黄曲霉毒素B， GB／T 5009．23—1996[薄层色谱法(第一法)／微柱筛选法(第二法)测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2;2.2 薄层色谱法;定性测定：将样液与标准液点样，用丙酮-三氯甲烷（8＋92）展开，晾干在365nm紫外光下观察，若在Rf值0.6附近有蓝紫色荧光点，可能有。然后在点样处滴加三氟乙酸，则AFTB1水解成AFTB2a ，极性增大， Rf值由0.6降为0.1。 定量测定：以最低检出限量0.0004μg为标准。 双向展开法：先用无水乙醚作横向展开，将干扰的杂质展至样液点外而AFTB1不动，然后再纵向展开。;2.3 酶联免疫吸附测定法;测定：用包被抗原（ AFTB1和牛血清白蛋白结合物）包被酶标微孔板，4℃过夜。用洗液洗去酶标微孔板多余抗原后，加入毒素标准溶液或样品提取液，然后再加入AFTB1抗单克隆抗体，37℃孵育。多余抗体用洗液洗去，加辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG， 37℃孵育。再次洗涤酶标微孔板，加底物四甲基联苯胺溶液， 37 ℃孵育后用硫酸中止反应。 方法说明：最低检出限浓度为0.01ppb；ELISA试剂盒低温保存。;包被固相载体: 用已知抗原包被 固相载体 ; 饲料中盐酸克伦特罗的测定 饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素， 赭曲霉毒素 ） 饲料中有害微生物的快速筛检 （如沙门氏菌 ）;河豚毒素 ;2.4 高效液相色谱测定法;方法说明： 提取时也可使用水溶性有机溶剂，如乙腈-水（9＋1）或甲醇-水（8＋2）。 本法流动相含有磷酸盐，用完后应用去离子水彻底冲洗，再用甲醇冲洗，以保护色谱柱。流动相也可用不含盐的组分如乙腈-甲醇-水（50＋150＋300）。 衍生化的目的是确证样品中是否含有AFTB1;;2.5 微柱筛选法; 由于AFT是一剧毒且强致癌性物质，使用时应特别小心应按以下规定进行实验操作和实验后的清洗消毒