医学论文-白细胞介素1B基因多态性、幽门螺杆菌感染与胃癌发生的相关性.docVIP

医学论文-白细胞介素1B基因多态性、幽门螺杆菌感染与胃癌发生的相关性 ????????????? 作者：廖爱军，苏琦，田锋，姚育红，曾斌 【摘要】? 目的 探讨湖南衡阳地区白细胞介素1B（IL1B）基因多态性与胃癌的关系以及幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）感染后胃癌发生的易感基因型。方法 52例胃癌患者癌旁正常胃粘膜组织和55例慢性胃炎患者胃粘膜组织，均经快速尿素酶和PCR检测HP，应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCRRFLP）分析技术，进行基因型检测，并对C/C、T/T进行测序，比较各基因型在胃癌组和胃炎组中的分布差异。结果 IL1B31T、IL1B511T等位基因和IL1B31T/T、IL1B511T/T基因型在胃癌组的分布频率高于胃炎组(P0.05)，OR值分别为1.97(95%CI=1.15～3.59)、2.52(95%CI=1.45～4.39)和2.71(95%CI=1.10～6.66)、3.33(95%CI=1.14～9.73)。在伴有HP感染的群体中进行比较，IL1B31位点各基因型未见明显差异；但IL1B511T等位基因和IL1B511T/T基因型在胃癌组的分布频率高于胃炎组(P0.05)，OR值分别为2.16(95%CI=1.10～4.23)和3.43(95%CI=1.01～11.62)。结论 在湖南衡阳地区IL1B31T/T、IL1B511T/T基因型与胃癌发病风险相关，在HP被感染后IL1B511T/T基因型可能为湖南衡阳地区胃癌易感基因型。 【关键词】? 白细胞介素1B；基因多态性；胃癌；幽门螺杆菌 ??? 胃癌是由环境因素和遗传因素共同引发的恶性肿瘤。在环境因素中，HP感染是主要因素，被认为是胃癌发生的启动因素和促进因素。目前世界上已有半数以上的人被HP感染，但其中大多数为无症状感染者，只有极少数发展成胃癌，因而认为存在这些差别的原因既有HP本身的因素，也有宿主本身的因素。 ??? 为此，本实验在湖南衡阳地区以慢性胃炎患者作为对照，探讨该地区患者被HP感染后IL1B31和IL1B511基因多态性与胃癌发生的关系。 ??? 1? 材料和方法 ??? 1.1? 材料 ??? 实验组：72例胃癌标本均来自2005年3月～2005年12月南华大学附一医院，经病理确诊(贲门癌除外)，所有病例术前均未行放疗或化疗，术前2周未口服抗生素治疗。取胃窦部约0.5g癌旁正常粘膜组织(距癌灶5cm)分为2块，1块行快速尿素酶检测HP,1块切成米粒大小置于-80℃冰箱冻存。实验组及对照组患者均来自于湖南衡阳地区。 ??? 对照组：70例标本来自本院胃镜室活检组织，无系统性红斑狼疮、炎性肠病、类风湿性关节炎和胃癌家族史，术前2周未口服抗生素治疗,病理确诊为慢性浅表性胃炎。取胃窦粘膜组织2块，1块行快速尿素酶检测HP，1块置于-80℃冰箱冻存。 ??? 1.2? 实验方法 ??? 1.2.1? 基因组DNA的提取 ??? 实验组胃窦部癌旁正常粘膜组织和对照组胃窦部粘膜组织，各取米粒大小一块，分别放入无菌EP管中用无菌眼科剪剪碎，按照上海生工DNA抽提试剂盒要求操作，DNA提取后于-20℃冰箱中保存。 ??? 1.2.2? HP的检测 ??? （1）快速尿素酶法检测HP? 试剂盒由福建三强公司提供，按试剂盒要求操作，加入组织样本后5min内颜色逐渐变红为阳性，不变色则为阴性。 ??? （2）PCR检测幽门螺杆菌(HP) UreA基因? 试剂盒由上海生工提供，引物参照文献[1]由上海生工合成，上游：5’GCCAATGGTAAATTAGTT3’；下游：5’CTCCTTAATTGTTTTTAC3’；扩增出的UreA基因片段长度为411bp。反应体系为25μl，包括PCR Master 12.5μl，上、下游引物各1μl，模板DNA1μl,去离子水9.5μl。反应条件为94℃ 5min 1个循环；94℃ 1min，47℃ 1min，72℃ 1min，35个循环；72℃延伸10min。产物于2%的琼脂糖凝胶（溴化乙锭染色）电泳，100V恒压30min，紫外灯下观察结果。出现411bp橙色条带的为HP阳性，无条带则为阴性，见图1。 ??? (3)诊断标准及检测结果? 所有标本经两种方法检测HP，两种方法同为阳性则为HP阳性，同为阴性则为HP阴性，一阳一阴者剔除。最后测出实验组标本52例，对照组标本55例。 ??? 1.2.3? 基因多态性检测 ??? (1)IL1B31和IL1B511位点PCR扩增? 引物由上海生工合成，序列为：IL1B31上游：5＇ ??? M：100bpDNA marker；14：HP阳性结果；5：阴性结果 ?