医学论文-妊娠肝内胆汁淤积症对围生儿不良影响的可能机制研究.docVIP

医学论文-妊娠肝内胆汁淤积症对围生儿不良影响的可能机制研究 【摘要】? 目的：探讨妊娠肝内胆汁淤积症（ICP）对围生儿的不良影响及其可能机制。方法：临床收集ICP和正常妊娠孕妇各30例，采集孕妇外周静脉血，分离血清；比较新生儿体重、身长，胎盘重量，羊水粪染和Apgar评分情况。随机选取正常妊娠脐带，行脐静脉内皮细胞分离培养，用两种血清刺激培养的内皮细胞，MTT法检测内皮细胞活力，ELISA法检测内皮细胞分泌血管内皮生长因子的变化。结果：ICP患者娩出的新生儿体重、胎盘重量和Apgar 1min评分明显低于正常孕妇组，羊水粪染率明显高于正常孕妇组，有统计学差异。MTT法发现随着血清浓度的增加，内皮细胞的OD值逐渐降低，两两比较有统计学差异；ICP组各浓度点OD值均低于相应正常孕妇组，P0.05。ELISA法发现：同正常孕妇组血清相比，ICP组血清HUVECs表达分泌型VEGF蛋白减少；随着血清浓度的升高，VEGF蛋白表达逐渐降低，有统计学差异。结论：ICP对围生儿产生不良影响。ICP围生儿预后不良可能与血管内皮细胞VEGF的分泌减少有关。 【关键词】? 妊娠肝内胆汁淤积症；围生儿；脐静脉；血管内皮细胞；血管内皮生长因子 ?妊娠肝内胆汁淤积症 ( intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是一种多发生于妊娠晚期的妊娠特有疾病，以患者出现皮肤瘙痒、胆酸升高和肝功能异常为特点。该病对孕妇的影响相对较轻，但是围生儿的患病率和死亡率非常高，可引起严重的胎儿窘迫、羊水粪染和胎儿生长受限。有研究者认为，ICP发生时胎盘血流灌注不足导致了胎儿缺氧。胎盘血管的发育受血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等的调节，VEGF具有刺激新血管发生与生长及维持血管壁完整性和通透性的作用，在胎盘血管形成及胎儿生长发育方面起着重要的作用。本研究选取ICP患者和正常妊娠孕妇各30例，测量新生儿体重、身长，胎盘重量，检查羊水粪染情况，行Apgar评分，观察ICP对围生儿的不良影响。以ICP患者血清刺激人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），检测细胞活力和VEGF蛋白的分泌量，探讨围生儿不良预后的可能机制。 　　1? 资料与方法 　　1.1? 一般资料收集2003年5~12月在东南大学附属中大医院和南京市妇幼保健院妇产科住院的正常妊娠孕妇和ICP患者各30例，无菌抽取孕妇肘前静脉血，测量新生儿体重、身长，胎盘重量，检查羊水粪染情况。从正常孕妇组中随机选取脐带（剖宫产术中）。纳入标准：正常妊娠组，整个孕期无合并症或并发症。ICP组，ICP诊断标准遵照《中华妇产科学》[1]，并排除合并妊高征、糖尿病、肾病、原发性高血压、贫血及其它内科合并症。正常妊娠孕妇及ICP组患者均为单胎初产妇，其年龄、孕次、孕周均相匹配，差异无显著性（P005）。孕龄诊断正确，均为36~38周未临产而行剖宫产者。否认有吸烟、激素治疗史。正常妊娠组系因骨盆、胎位、珍贵儿及社会因素等而行手术。 　　1.2? 方法剖宫产术中目测羊水性质，羊水污染程度按Odriscoll法分度。剖宫产断脐后立即称量新生儿体重（净重）、测量身长，行Apgar评分，并称量胎盘的重量（脐带于根部钳夹切断，距离胎盘2cm）。参照Jaffe法行HUVECs原代培养（获取脐带后无菌条件下用磷酸盐缓冲盐水充分洗涤脐静脉腔，向静脉腔内灌注01%胶原酶，置于37℃水浴中消化8min，收集消化液并离心，弃上清即可得脐静脉内皮细胞）,当细胞融合60%~80%时，加入不同浓度的ICP患者血清（血清浓度为0、5%、10%、15%和20%）刺激24h，以正常妊娠孕妇血清对照，MTT法检测HUVECs活力，按照ELISA试剂盒操作步骤检测培养上清液中分泌型可溶性VEGF的变化。 　　1.3? 试剂和仪器RPMI Medium 1640培养基（GIBCO BRL公司产品），胎牛血清(100ml·瓶-1，杭州四季青公司生产），Ⅳ型胶原酶（H＆Y biochemical corporation公司产品），MTT粉剂购自Sigma公司，ELISA试剂盒购自晶美生物工程北京有限公司；GBB16型CO2培养箱，OLYMPUS CK2型倒置显微镜，SPECTRA MAX250型酶联免疫检测仪，96孔培养板。1.4? 统计方法组间多个样本间比较采用方差分析，两两之间比较用q检验，两样本比较用成组t检验，羊水污染率的比较采用两样本χ2检验。 　　2? 结??? 果　　 2.1? 两组孕妇一般情况比较ICP组及正常孕妇组（各30例）孕妇均为单胎、初产，在年龄、孕次、孕周方面数值相当，均无统计