水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建 Construction of External Standard for Detection of Rotavirus in Water Using the Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction.pdfVIP

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2018-01-29 发布于上海
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水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建 Construction of External Standard for Detection of Rotavirus in Water Using the Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction.pdf

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水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建 Construction of External Standard for Detection of Rotavirus in Water Using the Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction

第29卷第2期环境科学 V01．29．No．2 2008年2月 Feb．．2008 ENVIRONMENTALSCIENCE 水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建胡秀华，何苗”，刘丽，李丹，施汉昌 (清华大学环境科学与工程系环境模拟与污染控制国家重点联合实验室，北京 100084) 获得的cDNA标准品进行特异性、稳定性和重复性指标的检验．结果表明，利用此标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率毒vfy7序列上的特异性产物，表明此标准品是轮状病毒特异性的；同时，所制备的标准品在实时定量PcR检测中具有较大的可长期稳定保存．构建的标准品可用作检测水环境中轮状病毒的实时荧光定量PcR的外标准品．关键词：轮状病毒；克隆；标准品；实时荧光定量PCR 中图分类号：x172文献标识码：A文章编号：0250-330l(2008)02．0380-06 for ConstructionofExtemalStandardDetectionofRotavirusinWater the Using Real-Time ChainReaction OuantitativePolymerase HU Xiu．hua，HEMiao，LIULi，LIDan，SHIHan．chang (StateJoint ofEnVironmentSimulationandPollution ofEnvimnmentalScienceand Key Laboratory Contml，Department 100084，China) Univer8ity，Beijing standardfordetectionofmtavimsin Abstract：Toconstmctextemal water the real—time chain usingquantitativepolymerase cDNAstandardforreal一￡imePCR was cellculture，PCRandT-Aclonemethodswilh forthevirals￡ructure assaypreparedby primersspec洒c VP7 thiscDNAstandardwasconn瑚ed andDNA and pmteingene，and byenzymecleavage sequencing．Specincity，stability ofthecDNAstandard weredetectedcommon chain real—timePCR．Theresultsof reaction(PCR)and quantified by polymerase quantitative a linear betweenthreshold and standardcunreshowed of number．The verygood negativeregression cycle(Ct)bgstartingquantity