PCR技术在临床检验中的应用PPT.ppt

LABType? SSO技术的特点 特异性位点扩增及最新的探针设计 可在同一块板同时扩增HLA-A,B,DR位点 降低非特异性扩增导致的反应信号 改善传统SSO技术的精确度, 将模棱两可率降到了1% 同一PCR扩增条件适用于所有位点 DNA浓度的可接受范围：10-200ng/μL 所有试剂不需要预先孵育（pre-incubation) 每次扩增96份标本 扩增时间90分钟 扩增后每处理96份标本时间90分钟（1个人） 扩增后标本可在4℃冰箱内储存72小时 标本可以重新测定 不需要制胶及电泳, 避免接触有毒物质 计算机分析结果 ，大大降低了人为误差 LABType? SSO技术的特点 多元化分析——在一个反应体系完成全部反应 无需试纸条或杂交膜 适于处理大样本分型，同时也适于小样本 自动读取数据和分析结果，降低人为误差 高效、准确和低成本 LABType? SSO技术的特点 LABType? SSO技术的原理 包被了探针的微球示意图 96孔读板 示意图 2. 变性、中和 3. 杂交 4. 标记 1. 扩增 三、 群体反应性抗体（PRA）检测及其方法 淋巴细胞 患者血清 ↓ ↓ 已知抗原 + 特异抗体 补体 细胞溶解 判断患者的免疫状态及HLA 抗体的特异性。 组织器官移植的常用检测项目 组织器官移植的常用检测项目 四、细胞色素P450酶系3A亚家族中CYP3A5 基因检测 CYP3A5基因多态性 CYP3A5 *1/*1和*1/*3型患者早期要达到目标血药浓度,需提高该组患者的起始用药剂量, CYP3A5 *3/*3型患者则应适当降低起始剂量。 根据CYP3A5基因多态性作为FK506个体化用药的依据,可以减少早期急性排斥反应及不良反应发生率。 组织器官移植后的实验室监测 （一）移植器官的功能监测 1.肝功能的监测 2.肾功能的监测 3.造血干细胞的功能监测 组织器官移植的常用检测项目 （二）移植排斥反应监测 1. 淋巴细胞亚群 2. 排斥反应相关细胞因子 3. 激活的淋巴细胞内细胞因子的检测 组织器官移植后的实验室监测 （三）免疫抑制剂药物血药浓度监测 1. 环孢素（CsA）浓度的监测 2. 他克莫司（FK506）浓度的监测 3. 马替麦考酚酯（骁悉）浓度监测 4. 雷帕明（RAPA）浓度监测 组织器官移植后的实验室监测 法医学研究 利用罪犯在犯罪现场留下的任何少量标本，如一根毛发、一滴血液、极小的血斑和精斑等其它分泌物或组织块等进行PCR扩增，结合指纹图谱等分析可进行个体识别、亲子鉴定、性别鉴定等。 STR技术在临床检验中的应用 DNA指纹技术（DNA Profile） 人类基因组超过90％的序列为重复序列，它们不编码mRNA前体或其它RNA，由串联、重复排列而成的DNA序列构成数量可变的串联重复序列，其串联重复单位的数目在人群中存在较大差异性，具有高度多态性。重复单位长度为10－70bp的称为小卫星DNA. DNA指纹图的遗传规律 遗传方式：子代图谱中所有的片段都可以在双亲的图谱中找到，片段的传递符合孟德尔遗传规律。 个体的组织同一性：即来源于身体不同部位与类型的组织，其DNA指纹图谱是一致的。 群体遗传学特征：无法判断各靶基因座位基因型，因此不能按照传统遗传学方法调查人群中等位基因数和分析等位基因的频率。 不同的个体有不同的DNA指纹图 DNA指纹图技术存在的缺点 无法确定等位基因。 对任何一条带，无法确定是由纯合子或杂合子产生。 无法确定每条带所代表的基因座即染色体定位。 无法确定基因座之间的独立性。 对检材要求较高。 STR（short tandem repeat） 短串联重复序列，也叫微卫星DNA，是一类广泛存在于真核生物基因组中的DNA串联重复序列。其核心序列为2-6bp，重复次数通常在15-30次。 DNA片段长度为100-350bp。它们也是染色体上的来自父母的配对的等位基因。 2-6bp 由于每个人STR基因座的核心单位重复次数不同，造成它们的DNA片段长度不同，因此构成了人群中极为高度的STR基因座的DNA片段长度的多态性。 多数STR基因座具有多态性，其高度多态性主要源于核心序列重复次数的个体间差异，这种差异在基因传递的过程中一般遵循孟德尔共显性