第五章 种子生活力与活力测定 种子检验学 教学课件.ppt

第五章 种子生活力与活力测定 ??第一节 种子生活力测定的目的意义 ??第二节 生物化学速测法 ??第三节 组织化学法 种子生活力测定的方法 种子生活力测定的方法有10多种，根据测定原理可大致分为4类： 1. 生物化学速测法（染色法：四唑法、溴麝香草酚蓝法、甲稀蓝法、中性红法和二硝基苯法等） 2. 组织化学法（靛蓝染色法、红墨水染色法、软x射线造影法） 3. 荧光分析法 4. 离体胚培养法 第二节 生化速测法 应用生化速测法测定种子生活力具有简单 方便、形象快速等特点。 目前最常用的方法有四唑染色法 N – N – C6H5 N - NH – C6H5 C6H5 – C +2e+2H+ C6H5 – C + HCl N = N – C6H5 N = N – C6H6 Cl- Live tissue + Colourless TZ → Red Stained Tissue Deteriorated tissue + Colourless TZ → Deep or mottled staining with flaccid texture Dead tissue + Colourless TZ → Unstained Tissue （三）药液的浓度 常用的四唑溶液浓度为0.1％～l.0％； 通常0.1％溶液用于切开种子，1.0 ％溶液用于整粒种子，溶液pH以6.5～7.5为宜。 为保证溶液pH通常采用磷酸缓冲液来溶解四唑粉剂。 （四）方法 1. 数取试样从净种子中数取试样100 × 4或100×2 2. 预湿、纵切或剥皮； 3. 染色 豆类 35℃ 3~4h 十字花科 35℃ 2~4h 4. 观察鉴定鲜红－－－－－－－有生命力种子 浅色或不染色－－－无生命力种子 5. 结果计算及处理 观察鉴定： 最好用5～25倍扩大镜或体视显微镜进行检查。 活种子的判别标准：主要结构的不染色部分不得超过1/3。凡是胚的主要构造染成鲜红色的，为正常有生活力的种子；凡是胚的主要构造或其之一不染色，或染成浅色斑点者为无生活力种子。 观察鉴定时，确定种子是否具有生活力，必须根据胚的主要构造和有关活营养组织的染色情况进行正确的判断。一般的鉴定原则是：凡胚的主要构造或有关活营养组织（如葱属、伞形科和茄科等种子的胚乳）全部染成有光泽的鲜红色或染色最大面积大于表1规定，且组织状态正常的为正常有生活力的种子；否则为无生活力的种子。根据种类的不同，具体鉴定标准详见表1。 5. 结果计算及处理 计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过表2的规定，平均百分率计算到最近似的整数。 第三节 组织化学法 一、靛蓝染色法 ?? 该法于1925年由原苏联学者H．A，Hunaop所发 明。在原苏联、东欧和我国等国有所应用。此法 适用于豆类、谷类、棉花、瓜类和林木等大粒种 子种类。 （—）试剂靛蓝（indigocarmin），又名靛蓝洋 红。分子式为C16H8O2N2(SO3Na)2。分子量为 466.37，为蓝色粉剂，缓慢溶于水。 二、红墨水法 其测定的基本原理和方法同靛蓝染色法。只是所染成的颜色不同。死种子的胚染成红色，活种子的胚则不染色。 应用于小麦种子生活力测定效果较好。其染色溶液浓度以1ml红墨水加人60ml水为宜，在室温下染色15min，然后即可冲洗和鉴定。 五、 * 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride (colorless) （氯化2，3，5-三苯基四氮唑） Formazan (red) （三苯基甲月替） 三 四 *