细胞培养 细胞培养技术教学课件.docVIP

第二章 细胞培养 第一节 细胞培养概述 一、细胞培养的历史沿革 细胞培养（cell culture）的历史可以追溯到1885年Willhelm Roux尝试利用盐水培养鸡胚组织并让其存活数天的记录。1907年，一位美国的动物学家Ross Granvlle Harrison利用悬滴法（hanging drop technique）将分离自青蛙胚胎的神经细胞种植在青蛙的淋巴液（frog lymph）中，并在培养数小时之后观察到轴突的生长，首次在体外模拟了细胞的生长以及复制等行为，Ross Granvlle Harrison也因此被誉为“细胞培养之父”。1910年，Montrose Thomas Burrows在从Harrison实验室学习了这种技术以后尝试用鸡血浆代替淋巴液培养细胞并获成功。此后，Montrose Thomas Burrows与其外科医生出身的同事Alexis Carrel进一步致力于哺乳动物组织的培养技术的研究。尤其是Alexis Carrel将外科手术严格的无菌技术引入细胞培养并发明了专门的细胞培养瓶（Carrel flask，卡氏培养瓶），显著改良了Ross Harrison所建立的培养技术并将其应用于成年组织细胞和肿瘤细胞的体外培养实践中。1912年，借着诺贝尔奖殊荣的激励，Alexis Carrel在体外成功培养了分离自鸡胚心脏的心肌细胞，并将其一直培养到了1946年。1949年，Alan Parks发明了–196oC超低温冻存细胞的技术，成为细胞培养历史上又一次重大的技术进步。此后，抗生素和胰蛋白酶的出现，也极大促进了细胞培养技术的发展。1951年，来自于一名名叫Henrietta Lacks的黑人子宫颈癌妇女患者肿瘤组织的HeLa细胞系被成功建系，成为为系统的细胞培养技术体系建立的标志。此后，越来越多的细胞系被建立，科学家也开始尝试应用这些细胞系进行科学研究。等到上世纪60、70年代，商业化的细胞培养技术手段及产品开始出现，并不断推动细胞培养技术发展到今天。 二、细胞培养的基本概念 细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。培养物tissue culture）和器官培养（organ culture）：组织培养的对象多为来自活体一部分组织；细胞培养的对象多为将组织经机械或酶消化后的单个细胞悬液；器官培养的对象多为整个器官或器官之一部分。实际上，一般意义上的细胞培养与组织培养之间并无严格界限，其在体外的培养对象主要都是细胞，故常笼统地认为此二者具有相同或相似的含义。与细胞和组织培养不同，器官培养时细胞的类别以及细胞间的毗邻关系对器官的结构乃至功能至关重要，故将其特称为器官培养，以示其与细胞或组织培养的区别。 三、体外培养细胞的条件模拟 细胞在体外能否生存以及生活质量的好坏严格依赖于所提供的这种人工模拟环境是否与体内的生理环境一致或相似。概括说来，这种人工模拟的生存环境主要包括以下几方面的因素： （一）营养需求 体外培养细胞时，营养需求是满足其生存、生长增殖的首要条件。而细胞培养基培养细胞供给细胞营养和促使细胞增殖的基础物质。aprotinin）、胎球蛋白、纤粘连蛋白、转铁蛋白以及各种多肽。血清白蛋白是血液中结合水、无机盐离子、游离脂肪酸、激素、维生素并在组织和细胞间转运它们的重要载体，血清白蛋白的这种特性很适合被用于清除细胞释放到培养基中的有毒代谢物质。抑肽酶也是细胞培养体系中的一种保护性因子，其能够在中性、酸性pH环境中稳定存在并对高温及蛋白水解酶的降解作用有一定的抵抗作用，能抑制一些丝氨酸蛋白酶如胰蛋白酶的作用。胎球蛋白是一种在胎儿和新生儿血清中含量较成年血清要高很多的一种糖蛋白，同样具有抑制丝氨酸蛋白酶的活性。纤粘连蛋白在细胞的粘附过程中扮演重要角色。转铁蛋白作为一种铁离子转运蛋白可以供给细胞所需之铁离子。而众多的小分子多肽则是重要的细胞生长调节因子。 （6）脂肪酸和脂类物质 脂肪酸和脂类物质也常有血清提供，尤其被一些特定的细胞系所必需。例如，用于培养胆固醇依赖的杂交瘤的培养基就需要添加一定量胆固醇。 （7）微量元素 微量元素常被添加给那些无血清培养基，以弥补因未添加血清所造成的微量元素缺失或不足，主要有锌、铜、硒等。其中硒对于清除培养基中的由代谢产生的自由基具有重要作用。 （8）血清 血清是一个包含大量蛋白以及多种生长因子、激素、氨基酸、糖、胰蛋白酶抑制剂、脂类物质、无机盐、微量元素等的非常复杂的混合物。最常用的血清主要有胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）、新生牛血清（newborn calf serum，NCS）、小牛血清（calf serum，CS）、马血清、猪血清以及人血清。 2、培养基 用于细胞培养的培养