细胞培养技术 第一章 绪论和基本理论.pptVIP

第一章 绪论和基本理论知识第一节 绪论 一、体外培养（In Vitro culture） 1、概念：将活体结构成分甚或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在体外环境中，让其生长和发育的方法。 组织培养：组织（多指组织块） 2、结构成分： 细胞培养：单个细胞或细胞群 器官培养：器官的原基、器官的 一部分或整个器官 第二节 生存环境、条件? 一、无污染环境：首要条件 二、温度 36.5℃±0.5℃（36℃~37℃） 三、气体环境和氢离子溶度 95 % 空气+5 % CO2 pH值为7.2~7.4 四、生存所需基本物质 （一）糖；（二）氨基酸； （三）促生长因子；（四）其它物质 五、渗透压：260 ~320 mOsm/kg （等渗） 六、培养基：天然培养基和合成培养基 第二章 设施和基本条件?第一节 实验室设计 第二节 无菌操作设施和工作间 一、净化工作台（super clean bench） 测流式、直流式和外流式 二、无菌操作室：更衣间、缓冲间和操作间 三、清洗和准备区：洗涤间，洗刷、浸酸 、 消毒、 蒸馏水 五、温育和贮存区：温箱、冰箱、干热箱、液氮罐 六、观察区：摄影器材、倒置显微镜 第三节 实验室设备 一、CO2培养箱 ：5 % CO2 ，T 36.5℃±0.5℃ 二、电热干燥箱：烘干和干热消毒 （60℃） 三、冰箱：培养用的溶液， 4℃、–20℃和–80℃ 四、显微镜 五、水纯化装置 六、过滤除菌装置（1） Zeiss滤器（2）玻璃漏斗式滤器（3）微孔滤膜滤器 七、细胞冷冻储存器：液氮罐、–80℃超低温冰箱 八、离心机、天平、电动吸液器和加样器 九、细胞计数板和电子细胞计数仪 十、pH计 十二、高压蒸汽消毒装置 十三、其它仪器 第四节 器械及培养器皿 常用的器械：手术剪、虹膜剪、镊子、止血钳等。 一、玻璃器皿 ：（1）玻璃瓶 （2）培养瓶 （3）培养皿 （4）吸管和吹打管 （5）离心管 二、塑料瓶皿：多孔培养板；培养皿；培养瓶； 第三章 培养用液 第一节 水和平衡盐溶液 一、水：二蒸水、三蒸水 二、BSS：Ringer液、PBS 液、D-Hanks 液和Hanks液 第二节 天然培养基—血清 一、种类：人血清和动物血清（牛、马、 猪、兔） 二、血清中成分：蛋白质、多肽、激素和 其它成分。 第三节 合成培养基 三、使用前处理：56℃水浴灭活30分钟 四、保存：灭活的血清保存于4℃中；未灭 活的血清保存在-20℃冰箱中。 二、合成培养液的配制 （一）培养液的制备 用干粉制备培养液的过程如下： （1）制备去离子水（玻璃三蒸水）； （2）加温水至15~30℃； （3）把干粉加入水中，搅拌令之溶解； （4）加NaHCO3； （5）加水至终量； （6）必要时用1N HCl或1N NaOH调节pH； （7）用0.22μm或小于此微孔滤膜滤过消毒。 （二）培养液的种类 二、pH调整液 1.NaCO3液：7.4%、5.6%、3.7% 2.HEPES（分子量238.31）液 三、抗生素液：青霉素、链霉素、卡那霉素和庆大霉素 第四章 清洗与消毒 一、玻璃器皿的清洗 （一）浸泡 （二）刷洗 （三）浸酸 : 24h 二、胶塞的清洗 三、塑料器皿的清洗 四、包装 （1）局部包装：较大的瓶皿、滤器，消毒筒等只把瓶口部分用硫酸纸包裹后，再罩以牛皮纸或棉布密包起来用线扎紧即可。 （2）全包装：比较小的培养皿、注射器、金属器械和胶塞等需采用全包装，现多包入铝饭盒 。 第二节 消 毒 一、物理消毒法 1.射线消毒法 ：60Co、X射线和加速器 2.干热消毒法 ：160℃保持60分钟 3.湿热消毒（高压蒸汽消毒）：15磅20分钟 4.滤过消毒：Zeiss滤器、微孔滤膜器 二、化学消毒法：来苏儿、新洁尔灭、过氧乙 酸和75% 酒精 三、抗生素消毒法 第五章