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第34 卷 分析化学 （FENXI HUAXUE ） 研究简报 第4 期 2006 年4 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 517 ～ 520 电泳中介微分析法测定超氧化物歧化酶 # 傅崇岗 杨冬芝 （聊城大学化学化工学院，聊城252059 ） 摘 要 基于超氧化物歧化酶（SOD ）对邻苯三酚自氧化的抑制作用和电泳中介微分析（EMMA ）技术建立了 一种测定SOD 的新方法。采用“三明治”式不同pH 缓冲液部分填充法，有利于邻苯三酚的自氧化反应，便于 观察SOD 的抑制作用，有利于反应产物与反应物的分离。对溶液填充模式、反应条件等实验参数进行了优 化。在最优条件下，邻苯三酚自氧化反应的抑制率I 与SOD 浓度C 在1. 00 × 102 ～ 6. 00 × 102 µg/ L 范围内呈 良好的线性关系，回归方程为：I （% ）= 0 . 0895C （g/ L ）+ 17 . 633 （r = 0 . 9973 ）。 µ 关键词 超氧化物歧化酶，电泳中介微分析，邻苯三酚 1 引 言 超氧化物歧化酶（SOD ）是一种含铜、铁、锌的金属酶，它能有效清除生物体内的超氧阴离子自由基， 预防和治疗由氧自由基引起的多种疾病，如炎症、自身免疫性疾病、缺血、再灌流损伤等，还有抗衰老、防 止皮肤色素沉着等功效，是一种很有价值的药用酶。目前已广泛用作化妆品的添加剂。SOD 测定方法 ［1］ ［2 ］ ［3 ］ 有邻苯三酚法 、肾上腺素法 和黄嘌呤氧化酶法 等，其中邻苯三酚自氧化法应用最多。由于生化 ［4 ］ 试剂价格昂贵，样品消耗量成为人们特别关注的问题。电泳中介微分析（EMMA ）由Bao 等 首先提出。 EMMA 在毛细管内集成了混合、反应及分离的全过程。在许多方面表现出其独特的优点，如样品消耗 量少、过程易于控制和自动化，试剂与试剂之间的无稀释混合等。目前EMMA 已经广泛用于柱内衍 ［5 ］ ［6 ～ 8 ］ ［9 ］ 生 ，酶活性 和酶抑制剂 研究中。电泳中介微分析用于SOD 活性测定的工作还未见报道，本实 验从探讨EMMA 的进样模式入手，优化了实验条件，建立了一种测定Cu/ Zn-SOD 活性的新方法。 2 实验部分 2 . 1 仪器与试剂 P/ ACE 5500 型毛细管电泳仪（美国Beckman 公司）；紫外检测器。System Gold 软件控制仪器操作 并采集数据（采集频率5 Hz ），未涂层熔融石英毛细管（河北永年光导纤维厂），内径50 µm ，总长37 cm ， 有效长度30 cm 。紫外可见阵列二级管分光光度计HP8453（美国惠普公司）。 Cu/ Zn-SOD（Sigma 公司），邻苯三酚和三羟甲基氨基甲烷（Tris ）（Aldrich 公司）；乙二胺四乙酸二钠 （EDTA ）（上海试剂一厂）。所用试剂均为分析纯，实验用水为三次蒸馏水。Tris-HAc 缓冲液B 和B 的