小鼠主动脉环血管新生模型的优化-江苏大学.pdfVIP

第２６卷第３期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２６ Ｎｏ．３ 　 ２０１６年５月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｙ２０１６ 　 　 　 　 　 　 小鼠主动脉环血管新生实验模型的优化 翁嘉懿，严金川，陈瑶，李波，李晓阳，徐源，刘俊 （江苏大学附属医院心内科，江苏 镇江２１２００１） ［摘要］　目的：建立优化体外培养小鼠主动脉环血管新生实验模型的条件和方法。方法：分离Ｃ５７ＢＬ／６小鼠的胸主 动脉，剔除主动脉周围的脂肪及结缔组织，使用 型胶原酶消化动脉，剥离血管外膜，将血管剪成０．５ｍｍ长的动脉 Ⅱ 环，置于预先包被有鼠尾 型胶原的９６孔板中培养，给予ＤＭＥＭ＋２．５％胎牛血清，ＤＭＥＭ＋１０％胎牛血清或ＤＭＥＭ Ⅰ ＋２．５％胎牛血清＋血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ，终浓度为５０ｎｇ／ｍＬ）１００ Ｌ／孔，覆盖胶原表面。倒置显微镜下观察动 μ 脉环新生微血管。免疫荧光染色鉴定内皮细胞。结果：鼠尾 型胶原包被的９６孔板（ＤＭＥＭ＋２．５％胎牛血清）内新 Ⅰ 生微血管数量明显多于２４孔板（ｔ＝－６．０００，Ｐ＜０．０５）。ＤＭＥＭ＋１０％胎牛血清组新生微血管数量明显高于ＤＭＥＭ ＋２．５％胎牛血清组和ＤＭＥＭ＋２．５％胎牛血清＋ＶＥＧＦ组。ＤＭＥＭ＋１０％胎牛血清组培养２～４ｄ后小鼠主动脉环开 始出芽，６～８ｄ后动脉环新生微血管分支、数量及长度达到高峰。结论：优化后的方法可以得到生长状态良好，出芽 率高，纯度高的离体小鼠动脉环血管新生实验模型。 ［关键词］　主动脉环；血管新生；组织培养 ［中图分类号］　Ｒ３３２　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１６）０３－０２２７－０４ ＤＯＩ： １０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１６０００５ Ａｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｕｓｅａｏｒｔｉｃｒｉｎｇａｓｓａｙｆｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ＷＥＮＧＪｉａｙｉ，ＹＡＮＪｉｎｃｈｕａｎ，ＣＨＥＮＹａｏ，ＬＩＢｏ，ＬＩＸｉａｏｙａｎｇ，ＸＵＹｕａｎ，ＬＩＵＪｕｎ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＺｈｅｎｊｉａｎｇＪｉａｎｇｓｕ２１２００１，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅｍｏｕｓｅａｏｒｔｉｃｒｉｎｇａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｓｓａｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ： ＴｈｅｔｈｏｒａｃｉｃａｏｒｔａｏｆＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｎｄａｌｌｅｘｔｒａｎｅｏｕｓｆａｔａｎｄｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｒｅ ｍｏｖｅｄ．Ｔｏｒｅｍｏｖｅｔｈｅｖａｓｃｕｌａｒａｄｖｅｎｔｉｔｉａ，ｔｈｅａｏｒｔａｗａｓｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ．Ｔｈｅａｏｒｔａｗｅｒｅｃｕｔ Ⅱ ｉｎｔｏｒｉｎｇｓ～０．５ｍｍｉｎｗｉｄｔｈａｎｄｔｈｅｒｉｎｇｓｗｅｒｅｅｍｂｅｄｅｄｉｎｔｈｅｗｅｌｌｓｏｆａ９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅｃｏａｔｅｄｗｉｔｈｔｙｐｅⅠ ｃｏｌｌａｇｅｎ．Ｔｈｅｅｍｂｅｄｄｅｄｒｉｎｇｓｗｅｒｅｆｅｄｗｉｔｈ１００ ＬｏｆＤＭＥＭｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｓｕｐｐｌｅｍ