二乙酰一肟法测定血清尿素PPT.pptVIP

二乙酰一肟法测定血清尿素;【目的要求】 掌握测定血清尿素氮的原理和方法，并应用二乙酰一肟法测定不同鱼类的血清尿素氮含量和理解血中尿素氮含量变化的生理意义 尿素是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一。氨基酸经脱氨基作用生成氨，氨对动物机体具有毒性。肝细胞具有使氨生成尿素的作用，所以尿素的生成是肝脏的解毒功能之一。肝脏合成的尿素通过血液运输至肾脏，由尿液中排出体外。所以血中尿素的来源是肝脏，而去路是通过肾脏的排泄作用。利用血液及尿中尿素氮含量可作为排泄功能的检验。 ;【原理】本实验采用二乙酰一肟法测定血清尿素氮。二乙酰一肟法系根据双乙酰与尿素形成二嗪衍生物的有色复合物的显色反应。由于双乙酰本身不稳定，故用二乙酰一肟来代替，其反应式如下： ;二乙酰一肟法操作步骤 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 基础管 回收管 血清 － － 0.02 0.018 0.018 尿素标准 － 0.02 － － 0.002 (高) 去离子水 0.02 － － 0.002 － 二乙酰一肟 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 0.5 0.5 混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。;【计算】 【参考范围】 血清尿素1.78～7.14mmol/L。 【临床意义】 1．血液尿素浓度增高 分生理性和病理性因素两方面。 (1) 生理因素：高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3～0.5mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63mmol/L。 (2) 病理因素 1) 肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。;【注意事项】 1．试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，(每小时小于5%)。煮沸显色经冷却后，应及时比色。 2．尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。 3．尿素浓度以前习惯用尿素氮mg/dl表示，因为一个尿素分子中有2个氮原子，所以1mmol尿??相当于28mg尿素氮(1mmol/L尿素相当于2.8mg/dL尿素氮)；另外还有以尿素氮mmol/L表示，则1mmol/L尿素＝2mmol/L尿素氮。世界卫生组织推荐尿素用mmol/L表示，我国卫生部临检中心也已规定一律使用此表示方法，不再用尿素氮一词。;【评价】 1．本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。在标本数量多时加热开始难以达到100℃，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。若改善加热条件，如采用在水浴锅底部加置高约5mm的网垫，在网垫上加热显色，可使CV由不加网垫时的6.46%降至2.99%。 2．线性上限仅达7.14mmol/L；回收率为96%～102.1%。 3．二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达171μmol/L、血红蛋白达10g/L均无影响。