内皮抑素PEG修饰产物药代动力学初步研究本科生毕业论文(设计)开题报告.docVIP

中国药科大学本科生毕业论文（设计）开题报告 姓名 陈海 学号 0342410 专业 生物技术 指导教师 高向东 课题名称 内皮抑素PEG修饰产物的药代动力学初步研究 课题性质 基础研究 √ 应用课题 设计型 调研综述 理论研究 开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字） 一、实验背景 研究表明肿瘤的形成、生长、浸润和转移的关键是肿瘤的血管化。1971 年, Folkman提出抗血管疗法,设想通过抑制肿瘤血管生成,使肿瘤细胞因缺血、缺氧而大部分死亡,从而延缓晚期肿瘤生长,延长患者带瘤生存期,并抑制转移灶生长,推迟复发。近年来寻找有效的血管生成抑制剂( tumor angiogenesis inhibitor, TAI)成为肿瘤研究领域的一个热点, 其中以O’Reilly等于1997年发现的内皮抑素( endostatin, ES)最为理想, 他们在EOMA(鼠血管内皮细胞瘤细胞株)的细胞培养上清液中经纯化获得一种新的、分子量为20kD的蛋白,能特异性抑制血管内皮细胞增殖,尤其对肿瘤诱导的血管新生具有强大抑制作用, 对其他非内皮细胞系无作用,因此被命名为内皮抑素（endostatin）。 在细胞水平上,内皮抑素对肿瘤血管内皮细胞增殖有选择性的抑制作用。它可以抑制肿瘤血管内皮细胞成纤维细胞生长因子(bFGF) 诱导下的增殖,但对血管内皮细胞生长因子(VEGF) 刺激增殖的内皮细胞作用不明显,并对静止的血管内皮细胞无作用;抑制刺激因子诱导下的血管内皮细胞迁移,通过体外试验发现,内皮抑素不仅抑制血管内皮细胞迁移,还可抑制肿瘤细胞在人工基底膜凝胶中的迁移。它也可诱导bFGF 刺激的血管内皮细胞凋亡。在组织器官水平上,内皮抑素可以抑制鸡胚绒毛尿囊膜、大鼠角膜、动脉环体外培养的新血管生成,对鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的抑制率达60 %。在整体水平上,内皮抑素对动物移植肿瘤有抑制作用,具有对不同类型的肿瘤抑瘤率相近、抑制率高、抑瘤作用呈良好的量-效依赖关系、无耐药倾向、无不良反应等特点。 国内外大量的文献报道表明内皮抑素能够有效控制非小细胞性肺癌、结肠癌、脑胶质瘤、纤维瘤、间皮瘤及淋巴瘤等各种实体瘤的生长、浸润和转移。虽然出现过缺乏抑制作用的少数案例，但总体说来，ES抑制肿瘤的效果是显著的。I期临床研究发现rh－endostatin在人体是安全的，即使剂量高达600mg/m2也未发现剂量限制性毒性，并已初步观察到肿瘤对其有一定的反应。国外的Ⅱ期临床实验表明endostain皮下给药，毒性很小，对于转移性神经内分泌肿瘤可能有效。国外的临床实验没有继续下去，可能原因是国外采用酵母表达，成本太高。但是国内在此方面的研究取得了突破性进展。罗永章等在天然endostatin的N末端添加了9个氨基酸，不仅使 ES 稳定性提高，半衰期延长， 而且生物活性增加。他们已完成了临床Ⅲ期实验，表明改造后的内皮抑素与化疗药物NP联用可能有一定的协同作用，可延长患者的肿瘤进展时间。该药物已于今年正式上市，商品名为恩度。 目前研究表明, 内皮抑素抑制血管生成可能的机制为: ①与VEGF 等血管生成刺激因子竞争性结合生长因子信号传导系统中的硫酸肝素蛋白多糖受体, 发挥抑制内皮细胞增生和肿瘤生长的作用; ②直接与血管内皮受体结合, 通过与血管内皮细胞膜glypican 的结合, 阻碍具有血管内皮细胞的α5 亚单位的整合素机能, 抑制血管内皮细胞的cmyc 表达等, 从而抑制内皮细胞的增生; ③内皮抑素可阻碍增生的内皮细胞与其基质蛋白的作用,从而诱导内皮细胞凋亡; 同时减少Bcl22、Bcl2x1 等抗凋亡蛋白的量, 促进血管内皮细胞凋亡加速, 从而抑制肿瘤血管形成; ④引起内皮细胞G期停滞,从而抑制内皮细胞增殖; ⑤可抑制血小板源性生长因子( PDGF ) 介导的血管周细胞的再生。 Endostatin 作为药物用于临床还存在许多问题：首先是它易被机体的免疫系统降解；其次,该药低氧环境易分解,不利于它在肿瘤局部生物活性的发挥；第三，很难大量制备稳定的具有生物活性的蛋白,因为内皮抑素是一个极不稳定的蛋白,容易失活；最后,应用内皮抑素治疗肿瘤是一个长期的过程,一旦停药肿瘤又会生长,而且由于药物分布问题,人体内用量要比动物实验大得多,所以需要重复注射大量的内皮抑素解决上述困难,必须改进治疗策略。 近年来采用聚乙二醇(polyethylene glycol , PEG)修饰可以解决或缓解蛋白质和多肽类在药用过程中存在的诸多问题。药物的聚乙二醇修饰(pegylation) 即PEG化,是将活化的聚乙二醇通过化学方法偶联到蛋白质、多肽、小分子有机药物和脂质体上。1977 年Abuchowsk