植物组织培养技术第一章第二章PPT.ppt

第一章 植物组织培养的基本条件及一般技术;;一、 实验室设计原则： 1、保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 2、培养室减少通风 3、具有缓冲室 二、实验室组成及其功能： （一）组成：化学实验室、洗涤室、无菌操作室（接种室）、培养室、细胞学实验室和温室或大棚。 ; （二）各实验室的设置及功能 1、化学实验室（准备室）：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。 主要设备： 药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器。 ;;灭菌设备：高压蒸气灭菌锅 用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。 工作原理：在密闭的蒸锅内，0．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。;使用方法：首先检查灭菌锅内是否有水，而且水刚好淹住加热器，然后放入灭菌材料，对称拧紧灭菌锅上的螺丝，关闭放气阀通电。待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0.1-0.15Mpa时，维持20min后，断电，待压力降至零时，打开入入气阀，取出灭菌材料。 注意事项：①对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间；②对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min；③高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单位。因此，调PH值时，可适当调高0.1－0.3个单位。④接通电源前一定要加入足量的水。;3、无菌操作室（接种室）： 主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。 主要设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。 ;;接种设备：无菌超净工作台 用于培养材料的消毒及接种。 使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上面进行操作。;电炉;4、培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性能。 培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设5层，最低一层离地高约l0cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计， 如采用40W日光灯，则长1.3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。 ;;培养设备 ①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培养。;②恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及暗培养。;③摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养基中的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤组织中获得单个细胞。但注意要设定适合的温度及转速。;5、细胞学实验室：用于对培养物的观察分析与培养物的计数等。 主要设备：双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。 其他小型仪器设备：分注器、血球计数器、移液枪、过滤灭菌器、电炉等加热器具、磁力搅拌器、低速台式离心机等。 ;显微镜包括解剖镜，倒置显微镜，生物显微镜等。如茎尖的分离则需要解借助解剖镜。 ;;4.驯化设备;5、其它辅助设备;③ 除湿机：使培养室的湿度保持在定的范围内。;④烘箱：用于干燥洗净后的玻璃器皿，还可用80℃的温度烘干组织培养植物材料以测定干物质。;⑥纯水机与蒸馏水发生器： ;⑦天平：天平包括分析天平，电子天平，药物天平等，用于制备母液时培养基组成成分的称取。如一些需要量少的激素和微生素类物质，天平的精确度要到0.0001g，这就要求精确度更高的分析天平。;⑧酸度计：用于校正培养基和酶制剂的PH。;第二节 培养基;;二、培养基的种类;目前国际上流行的培养基有几十种，常用的培养基及特点如下：;;;; 5、KM—8P培养基 它是1974年为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。 ;;三、培养基的成分;（一）水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变