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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 五.渗透压 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物,因此,而影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用,2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用,而5-6个大气压植物生长就会完全停止,6个大气压植物细胞就不能生存 培养基各种物质中,糖对培养基渗透压起决定性作用。因此调节渗透压往往从调节糖浓度着手。糖除了作为渗透压调节物质外,还是培养基重要的碳源和能源。另外,甘露醇,山梨醇等也可以作为调节物质。 渗透压调节物质 氧气是培养中必需的因素,瓶盖封闭时要考虑通气问题,可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口,但棉塞易使培养基干燥,夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。培养室要经常换气,改善室内的通气状况。液体振荡培养时,要考虑振荡的次数、振幅等,同时要考虑容器的类型、培养基等。 六.气体 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 4、低无机盐含量培养基大量元素含量大幅度降低而且种类减少,有机含量相对也很低。多数用于生根培养基,主要有White、Heller、WS、HE、HB。 初代培养基:用来第一次接种外植体的培养基继代培养基:用来接种继初代培养物的培养基。 根据培养物的培养过程,培养基分为: 根据其作用不同,培养基分为:诱导培养基增殖培养基生根培养基 4、根据其营养水平不同,培养基可分为基本培养基和完全培养基。基本培养基(就是通常称呼的培养基)主要有MS、White、 N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、 Miller等。完全培养基就是基本培养基的基础上,根据试验的不同需要,附加一些物质,如生长调节物质和其他复杂有机物质等。MS+6-BA0.5+KT0.5+NAA0.5+Su3%+Ag0.7% 1.无机营养成分:一般在现有培养基配方中选择。可以参考前人的经验,例如:MS是广谱性培养基,N6用于单子叶植物的培养。豆科多用B5培养基。2、植物生长调节剂:必须进行筛选试验。总体原则-当诱导愈伤组织形成时,细胞分裂素和生长素相对平衡;诱导芽分化时,细胞分裂素水平应高于生长素,诱导根则要低。3、有机成分要根据培养类型考虑,如进行器官和组织培养,一般不加复杂有机成分,而进行细胞和原生质体培养则要加。 培养基的筛选: (一)、贮备液(母液)的配制 为什么要配制母液? 1)、方便 2)、准确(有些成分量太小) 三、培养基的配制 1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍,按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中,即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶,贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时,每配1L培养基取此液100ml。 注意:(1) 某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应,产生沉淀物。为避免此现象发生,母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用等级较高的分析纯,各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合,混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合,速度宜慢,边搅拌边混合。(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。另外,CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾,操作时要防止其溢出。 2、微量元素母液的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物(除Fe)组成。微量元素用量较少,特别是?CuSO4·5H2O、?CoCl2·6H2O?,因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2,表3配方,用感量为0.0001g的分析天平称量,其它同大量元素。配制培养基时,每配制1L培养基,取微量Ⅰ10ml,微量Ⅱ1ml 3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液,如柠檬酸铁,只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物,必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便,又比较稳定,不易发生沉淀。配制方法同上,直接用蒸馏水加热搅拌溶解。配制培养基时,配制1L取此液10ml。 在配制铁盐时,如果加热搅拌时间过短,会造成Fe S 04和Na2EDTA鳌合不彻底,此时若将其冷藏,Fe S 04会结晶析出。为避免此现象
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