蛋白质的鉴定、分析以及分子量和浓度的测定protein identification 2-培训讲座课件PPT.pdfVIP

第三章 蛋白质的鉴定和分析、 分子量及浓度测定 李 卫 芳 中国科学技术大学生命科学学院 3607932 3.2.4. The principles of CE 毛细管电泳 （Capillary electrophoresis, CE ） 兼有电泳和色谱技术的双重优点 高效、高速、高灵敏度和高自动化而被认为是九十年代最 重要的分离、分析手段之一。 以高压电场为驱动力，以毛细管和其内壁为通道及载体， 利用样品各组份之间电泳淌度或分配行为的差异而实现分离 的液相分离技术。 常用的操作模式有： 毛细管区带电泳(CZE) 毛细管胶束电动色谱(MECC) 凝胶电泳(CGE) 毛细管等电聚焦(CIEP) 毛细管等速电泳(CITP) 毛细管电色谱(CEC) 3.4 了解几种的常见电泳染色方法 氨基黑 阿尔辛蓝 灵敏度不高 染 色 过碘酸－Schiff试剂 检 考马斯亮蓝（G-250，R-250) 测 银试剂 －－－－ 丹磺酰氯 Pr-荧光 荧 光 试剂标记， 探 再电泳 荧光胺 针 方 法 MDPF Pr先电泳， 再移至荧 OPA 光试剂中 ANS Bis －ANS 置紫外灯检测，显示蛋白质荧光谱带 酶活性的测定 酶，胶内反应。 酶催化底物，底物从无色变成有色，从而显示条带。 Gabriel, Locating enzymes on Gels Meth. Enzymol., 1971,22:578-604 。 例如：过氧化物酶 SOD 超氧化物歧化酶 淀粉酶 脂酶等等 1. Rapid ethanol-based Coomassie Blue staining 灵敏度：0.2 - 0.5 μg 最小检出量：0.1 μg 2. Silver Staining 最小检出量：2 ng Rapid ethanol-based Coomassie Blue staining 考马斯亮蓝最初用于羊毛衫的染色，它的命名是为纪念1896 年被英国占领的阿散提部落首府Kumasie （Coomassie）。 染色最早由Fazekas Webster在1963年用于醋酸纤维素膜 电泳，并认为同样可用于纸电泳，琼脂糖电泳和淀粉凝胶电 泳。 1965年Meyer等将此方法应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (Fazekas de St. Groth, et al,1963， Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips. Biochim.Biophy