污染生态修复微生物的技术.ppt

微生物学实验常用仪器 pH计 微生物学实验常用仪器 分光光度计 微生物学实验常用仪器 发酵罐 微生物学实验常用仪器 冰箱/超低温冰箱 微生物学实验常用仪器 离心机 微生物学实验常用仪器 PCR仪 微生物学实验常用仪器 电泳仪 （垂直板，水平板） 微生物学实验常用仪器 凝胶成像系统 紫外检测仪 微生物学实验常用仪器 液氮罐 微生物学实验常用仪器 振荡器 微生物学实验常用仪器 真空泵 1、在环境污染微生物修复过程中，通常从哪些方面研究微生物？ 2、简述石油污染的土壤，微生物修复的技术原理 * 名称：超净工作台 用处：无菌操作 注意：内部无菌，空气直接外排，只适合对人体无害的微生物操作，如水体里的细菌，浮游病毒 * 名称：生物安全柜 用处：无菌操作 * 名称：高压灭菌锅 用处：灭菌 注意： * 名称：烘箱 用处：干燥 * 名称：滤器 用处：溶液，水样的超滤 注意： * 名称：移液枪、电动加样器 用处：溶液的准确量取 注意：塞紧，勿倒置 * 名称：光学显微镜（上）、荧光显微镜（左下）、倒置显微镜（右下） * 名称：CO2培养箱 用处：细菌培养 * 名称：pH计 用处：测定pH值 * 名称：分光光度计 用处：水样中物质浓度测定 * 名称：发酵罐 用处：发酵培养 * 名称：冰箱 用处：样品保存 注意： * 名称：离心机 用处：离心 注意：转速和重力换算 * 名称：PCR仪 用处：基因扩增 * 名称：电泳仪（垂直板，水平板） 用处：电泳分离生物大分子等 注意： * 名称：凝胶成像系统（左） 紫外检测仪（右） 用处：胶带的成像、分析 注意： * 名称：液氮罐 用处：盛装液氮 注意： * 名称：振荡器 用处：溶液混匀 注意： * 名称：真空泵 用处：抽提动力 1、消毒 使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。 2、灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。 （二）无菌技术 常用的消毒方法 1、煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 …… 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160 ℃ -170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min。 常用的灭菌方法 （三）倒平板技术 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 二、微生物的分离与纯化 平板划线法 稀释涂布平板法 稀释培养法 （一）平板划线的操作 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 （二）稀释涂布平板法 （三）稀释纯化法 1 2 3 4 5 6 7 0.1ml的10-1菌液 注意：每次稀释前摇匀！ 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1 分离单菌落 10-7 1