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黄芩苷抗金黄色葡萄球菌α-溶血素作用机制的确证 指导教师：陈志宝 班 级：生物技术 姓 名：周薇 学 号：20094081129 简介 金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus,（简称为金葡菌）是常见的革兰氏阳性致病菌，是极其重要的人兽共患病原体。 1 2 本研究应用定点残基突变和荧光淬灭试验验证黄芩苷与α-溶血素的结合位点。通过将α-溶血素氨基酸序列中的Tyr148、Pro151和Phe153突变为丙氨酸（Ala），表达和纯化野生型α-溶血素及突变体α-溶血素，应用荧光淬灭试验测定结合常数，结果表明，突变后的α-溶血素与黄芩苷的结合明显降低，结合常数大小为野生型 F153A P151A Y148A。通过脱氧胆酸诱导的寡聚化和SDS验证了黄芩苷对α-溶血素七聚体形成的影响。 材料与方法 菌株及载体：金黄色葡萄球菌8325-4 大肠杆菌DH5α、BL21 主要试剂：PBS缓冲液 Amp 贮液 IPTG 贮液 离子交换缓冲液（Buffer A） 离子交换缓冲液（Buffer B） 5 mM脱氧胆酸钠溶液 仪器：普通PCR扩增仪 电泳系统 凝胶成像分析系统 超声波细胞破碎仪 Akta purifier 恒温水浴锅 超净工作台 生化培养箱 恒温摇床 紫外分光光度计