微生物工程-03微生物育种及工业菌种退化复壮和保藏.docVIP

微生物育种及工业菌种退化复壮和保藏方法 一、代谢调控育种Metabolic Control Breeding １.营养缺陷型突变株（auxotroph mutant） 酶缺陷，结果造成中间产物积累； 解除协同反馈，使另一分支末端产物积累； 渗漏型突变（酶未完全丧失活性，下降），末端产物少，中间产物积累。 2.抗反馈调节突变株（regulation defective mutant） 突变株筛选 调节基因或操纵基因突变，产生的阻遏蛋白与不能结合或结合； 结合，但不发生作用； 结构基因突变，使结构酶无结合能力但有催化活性； 方法：末端产物结构类似物筛选； 　　　营养缺陷型回复突变株筛选． 3.组成型突变株（constitutive mutant）筛选 突变发生在调节基因或操纵基因,解除对诱导物的依赖,可获组成型突变株。 筛选方法：设计条件使组成型优势生长，或通过菌落分辨。 　　 ①加诱导酶合成抑制物 　　　②交替培养法 　　　③显色反应法 ４.抗（敏感）性突变株（resistant mutant）筛选 包括：抗生素、金属离子、温度、噬菌体 ①抗生素抗性突变：提高产量 ②抗噬菌体突变：消除噬菌体污染 ③条件抗性突变：如温度，可提高产量 ④物敏突变：如氟乙酸敏感突变型，顺乌头酸 酶活性极低，异柠檬酸产量少，