pfu高保真酶结合双硫代修饰引物检测高度近视患者znf644基因突变word论文.docxVIP

主要英文缩写词索引英文缩写AD英文全称Autosomal dominant中文译名染色体显性遗传AR XRZNF644PCRAutosomal recessive X-linked recessiveZinc Finger Protein 644polymerase chain reaction常染色体隐性遗传X-连锁隐性遗传 锌指蛋白 644 聚合酶链反应DNA EBbp SNPAS-PCR LODSTRdeoxyribonucleic acid Ethidium bromide base pairsingle nucleotide polymorphisms Allele-specific PCRAdvantage logarithmic analysisPolymorphisms of short tandem repeat脱氧核糖核酸溴化乙锭 碱基对单核苷酸多态性 等位基因特异 PCR 优势对数分析法 简短窜联重复序列多态性QTL TDTBEDanalysis of quantitative trait loci transmission disequlibriam testBornholm eye disease数量性状位点的方法传递不平衡检验 博恩霍姆眼病1Pfu 高保真酶结合双硫代修饰引物检测高度近视患者 ZNF644 基因突变 中文摘要目的：利用 Pfu 高保真 DNA 聚合酶结合双硫代磷酸化修饰引物，建立能准确 和敏感识别高度近视患者 ZNF644 基因 I587V、3UTR+592GA 2 个突变位点的方 法，为我们检测和筛查高度近视患者 ZNF644 基因突变，进一步验证 ZNF644 基因 与高度近视的相关性提供方法学依据。方法：在 NCBI Gene 数据库中查找到 ZNF644 基因序列，同时根据文献中所报 道的关于 ZNF644 基因的突变情况，明确其 I587V 和 3UTR+592GA 两个突变位 点所在序列中的位置。提取正常人血液基因组 DNA，根据已知 ZNF644 基因突变 I587V 、3UTR+592GA 区域序列，分别设计目的基因序列扩增引物进行引物延 伸反应，将其 PCR 产物克隆到 pGEM-T EASY 载体，得到 ZNF644 基因的野生型克 隆，再用定点突变方法突变为突变位点的基因突变型克隆，然后以此构建的重组 质粒作为研究模板，分别设计 3’末端与突变型基因位点或野生型基因位点配对 的引物，双硫代磷酸化修饰 3’末端并偶联高保真聚合酶构成的基因突变敏感性 分子开关，对突变型质粒模板及野生型质粒模板进行引物延伸反应并通过凝胶成 像系统对其进行分析。结果：明确了 I587V、3UTR+592GA 2 个突变所在的基因序列以及其突变位点 所在的位置，克隆出了含目的突变位点的 DNA 片段，并且定点突变得到了相应 突变位点的突变基因型，构建出了含有目的基因的野生型质粒模板和突变型质粒 模板。当突变引物对与突变型质粒模板配对时，引物被延伸，有 PCR 产物；与 野生型质粒模板不配对时，引物不能被延伸，无 PCP 产物。 同样，野生引物对 只有与野生型质粒模板匹配时得以延伸，而与突变模板不匹配时则不能延伸。 结论：pfu 高保真聚合酶结合双硫代修饰引物能准确快速地检测高度近视患者 ZNF644 基因 I587V、3UTR+592GA 2 个突变，从而能为我们筛查高度近视患者 ZNF644 基因突变，验证 ZNF644 基因与高度近视的相关性提供一种有效的方法。 关键词：Pfu 高保真酶；双硫代修饰引物；高度近视；ZNF644 基因突变2Detection of ZNF644 Mutations in High Myopia by pfu high-fidelity DNA polymerase with double phosphorothioate modified allele specific primersAbstractObjective:Using the high fidelity pfu DNA polymerase with phosphorothioate modified allele specific primers,established accurate and sensitive method for detecting two ZNF644 Mutations—I587V and 3UTR+592GA in High Myopia.By this method we could detect and sceen ZNF644 mutations and further verify the correlation of ZNF644 gene and