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第二章 杀菌剂的毒力测定方法 完整的杀菌剂生物测定技术： 药剂毒力测定、 定性定量分析、 防治效果测定 杀菌剂室内毒力测定与田间药效： 很一致 趋势一致 不一致 一致的情况： 多菌灵对由镰刀菌引起的麦类赤霉病和恶苗病。 不一致的情况： 多菌灵对同样是由镰刀菌引起的棉枯黄、萎病菌。 完全不一致的情况： 室内毒力测定，完全不表现活性 如：嘧啶胺类化合物在室内，以100ug/ml对灰霉病菌孢子没有抑制作用； 300ug/ml对菌丝生长也不能抑制； 1ug/ml的浓度在田间使用时，却能很好的防治灰霉病。 药剂与病菌的作用关系 传统的：以其“毒力”抑制或杀死病菌。一般是一致的。 病菌 药剂 环境 新类型的杀菌剂： 影响病菌的致病过程； 影响寄主的抗病性； 孢子萌发试验法的注意事项： 1 ） 洁净的用具； 载玻片表面必须对供试菌无毒、对孢子萌发无促进作用、并能使液滴扩散一致。 2 ） 药剂附着： 混合滴加、先后滴加、精密喷布 3 ） 供试菌种 菌种纯、能产生大量孢子、孢子体形大，在显微镜下易观查、 4 ） 孢了悬浮液的配制 尽可能的使供试菌产生大量孢子（培养基、培养条件、培养方法和时间） 单位容积内的孢子数： 50000个/ml左右，依孢子大小，一般在低倍镜下（接目镜X 10，接物镜X10），每个视野20-30个孢子。 有些孢子较大时还可以适当降低。 5）孢子萌发的条件 主要是温、湿、光、气、养分等的调节，不同病菌孢子所需要萌发条件是不一样的。 6）孢子萌发标准 一般以孢子萌发后的芽管大于孢子短半径时即为萌发。 有些产生游动孢子的则要以孢子囊为空壳的作为萌发孢子。 7）结果统计 不用药的对照处理，理论上的孢子萌发率应为100%，若不为100%，要对药剂处理的孢子萌发率进行校正。 如果对照孢子萌发率在80%以上时： 处理萌发率（%） 校正萌发率=------------------------X100% 对照萌发率（%） 如果对照的萌发率较高可采用简单校正法： 即在各处理组的调查孢子总数中增加调查孢子数量，增加的数量根据对照组孢子萌发率换算出来。 如：CK孢子萌发率达98%时，在调查处理组时，拟定调查数量为100时，此时就要调查102个，并对其不萌发孢子数减去2，然后计算孢子萌发率。 如果对照的孢子萌发率低于80%，应视为试验失败，需重做。 8）药剂抑制病菌孢子的毒力表示： ED50 但对同一材料不同操作人员或同一操作人员不同时间所作的结果，可能会出现差异。 标准波尔多液的ED50 波尔多液系数=----------------------------- 供试药剂的ED50 2 生长速率测定法 原理：将不同浓度的药液与溶化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病原菌生长速度快慢判定药剂毒力大小。 生长速率测定法注意事项： 1）带毒培养基的制作 应先加药液再加培养基（1：9）；对一些受热易分解的药剂则要待培养基冷却到50度左右时再加入。 2）接种病原菌 如果是菌丝接种，打孔制作菌饼时取材要从种菌皿的外缘开始，避免使用中心区的菌丝。 如果是孢子液接种，用接种针蘸取孢子液后，在带药培养基上划一直线。 3）结果检查 菌饼接种的结果检查： 测菌落直径，对每个菌落采取十字交叉法测两个直径，以其均数代表菌落大小。 CK菌落直径-处理菌落直径 抑制生长率=---------------