喜树碱和10-羟基喜树碱提取方法的比较与优化.docVIP

喜树碱和10-羟基喜树碱提取方法的比较与优化 　　摘要：以乙醇为溶剂，比较了浸提法、超声波法、微波法和匀浆提取法从喜树幼叶中提取喜树碱和１０－羟基喜树碱的效果，并通过正交试验设计对提取温度、提取时间以及匀浆时间对提取效率的影响进行了分析。利用反向－高效液相荧光法检测喜树碱和１０－羟基喜树碱的浓度。结果显示提取１０－羟基喜树碱的最优条件为匀浆１２ ｍｉｎ、６０ 浸提３０ ｍｉｎ、超声处理３０ ｍｉｎ；提取喜树碱的最优方案为匀浆１２ ｍｉｎ、６０ 浸提３０ ｍｉｎ、超声处理１５ ｍｉｎ。多种提取工艺混合使用能显著提高喜树碱和１０－羟基喜树碱的产率。 　　关键词：喜树碱；１０－羟基喜树碱；喜树；提取方法 　　中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11421－4459-04 　　 　　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ 　　１０－Hｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｆｒｏｍ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ 　　 　　ＳＨＥＮ Ｓｈａｏ－ｈｕａ，ＬＩＵ Ｊｉ－ｙａｎ，ＨＵ Ｊｉａｎｇ－ｑｉｎ，ＣＨＥＮ Ｂｏ，ＷＡＮＧ Ｌｉ－ｌｉｎ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｓｏｌｖｅｎｔ， ４ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｔｉｒｒｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ， ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ， ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗere ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ １０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｆｒｏｍ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ＣＰＴ ａｎｄ ＨＣＰＴ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ． Ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ reverse-high performance liquid fluorescence method． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ＨＣＰＴ ｗｅｒｅ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ １２ ｍｉｎ， ６０ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ； ｗｈｉｌｅ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ＣＰＴ ｗｅｒｅ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ １２ ｍｉｎ， ６０ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ １５ ｍｉｎ. Ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｃｏｕｌｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ； １０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ； Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ 　　 　　喜树为山茱萸目珙桐科旱莲属植物，是中国特有的多年生高大落叶乔木。喜树碱最早从喜树中分离，具有独特的抗癌功效，１０－羟基喜树碱是喜树碱的衍生物，与喜树碱相比，其毒副作用更小［１］。研究表明，喜树碱及其衍生物对多种癌症均有一定疗效［２－５］，而结合其他药物能显著提高其抗癌功效［６－９］。喜树碱和１０－羟基喜树碱广泛分布于喜树各组织器官，关于喜树碱和１０－羟基喜树碱提取方法的报道很多，有研究表明以体积分数５５％左右的乙醇溶液为溶剂，提取喜树碱和１０－羟基喜树碱效果最佳［１０－１３］。考虑到试验的安全性以及成本因素，本试验以５５％的乙醇为提取剂，以三年生喜树的幼叶为材料，采用浸提法、超声波提取法、匀浆法，并首次利用微波处理提取喜树中喜树碱和１０－羟基喜树碱，应用反向高效液相荧光检测法检测其提取效果，以期找到同时提取喜树碱和１０－羟基喜树碱的最佳方法。 　　１材料与方法 　　１．１试验材料 　　以温室内生长的三年生喜树幼苗的叶片为供试材料，６０ 烘干至恒重，研磨成粉末，避光保存备用。喜树碱和１０－羟基喜树碱标准品购自美国Ｓｉｇｍａ公司。 　　试剂：乙腈为ＨＰＬＣ级，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。仪器：ＫＱ５２００ＤＥ型超声波清洗仪