免疫组织化学染色技术常见问题及解答.doc

免疫组织化学染色技术常见问题及解答 上海太阳生物技术有限公司 2009年4月  前 言 上海太阳生物技术有限公司成立于1996年，是专门从事诊断试剂的生产型企业。上海太阳生物技术有限公司除了为客户捉供可靠优质的产品外，还十分重视致力于新产品的开发研究以及新技术的推广服务。近年来，太阳生物技术有限公司在提供产品和服务过程中，不断积累经验，以便更好的服务客户，提高自身品牌形象。 目前，虽然免疫组化技术已趋于成熟和普及，但在临床病理实际应用中，仍存在不少问题，离免疫组化标准化的目标还有很大的距离，影响了病理诊断结果的可靠性。为此，我们通过阅读文献资料并结合实践积累和体会的一些经验，将免疫组化实验中经常发生的一些不稳定因素和相关知识汇编成册，供免疫组化工作者参考，希望能对大家的工作有所帮助，由于我们自身的水平有限，本册中难免会有不尽如人意之处，敬请读者批评指正，以便今后加以改进。 目 录 一、免疫组织化学染色概述 1．什么是免疫组织化学染色? 2．免疫组织化学染色的方法有哪些? 3．几种常用免疫组织化学方法的原理是什么? 4．免疫组织化学技术的优点是什么? 5．免疫组织化学染色中标识物质的选择有哪些条件? 6．免疫组织化学染色成功的关键因素有哪些? 7．怎样设立各种对照? 8．如何选用高敏感免疫组化染色方法? 9．免疫组织化学染色中常见的抗原表达模式有哪几种? 10．免疫组织化学染色结果如何分析? 11．如何选择石蜡切片和冰冻切片的应用? 12．快速冰冻切片免疫组织化学染色的优点是什么? 13．免疫组织化学染色在临床病理诊断中主要用于哪些方面? 二、组织前期处理 14．组织固定不当常由哪些原因引起?怎样更好地保存组织的抗原性? 15．组织脱水、透明、浸蜡中要注意哪些问题? 16．骨组织的免疫组织化学染色技术要点是什么? 17．免疫组织化学染色中怎样防止脱片? 18．常用的防脱片剂(粘合剂)有哪些? 19．如何才能充分脱蜡? 三、抗原修复 20．什么是抗原修复?免疫组织化学染色中为什么要进行抗原修复? 21．抗原修复技术的原理是什么? 22．抗原修复的方法有哪些? 23．抗原修复的常用方法有哪些?怎样操作? 24．抗原修复方法的选择中应注意哪些问题? 四、染色的假阴性和假阳性 25．怎样消除除内源性过氧化物酶? 26．怎样消除除内源性生物素? 27．怎样选择封闭血清? 28．组织切片背景深通常与哪些因素有关? 29．边缘效应产生的主要原因是什么?怎样解决? 30．怎样解决间质着色的问题? 31．造成假阴性结果的常见原因是什么?怎样解决? 32．造成假阳性结果的常见原因是什么?怎样解决? 33．造成阳性染色信号弱的常见原因是什么?怎样解决? 五、一抗的选择与保存 34．一抗的选择要点和技巧是什么? 35．怎样保存和稀释抗体? 六、显色与复染 36．常用的显色系统有哪些? 37．DAB显色时间如何把握? 38．免疫组织化学染色后为什么要进行背景复染?复染有哪些方法? 39．苏木素复染的时间如何把握? 一、免疫组织化学染色概述 1．什么是免疫组织化学染色? 答：免疫组织化学染色(1mmunohistochemical staining，IHCS)技术是用己知标记的特异性抗体或抗原对组织内相应抗原或抗体进行定性、定位或定量检测，经组织化学反应，使标记于特异性抗体的酶、金属及荧光素等呈现出某种颜色，并借助于光镜、荧光显微镜及电子显微镜等观察所显示的颜色和变化，从而了解抗原或抗体结合部位和含量的一门新兴检测技术。它己广泛应用于病理诊断、鉴别诊断和研究之中。 2．免疫组织化学染色的方法有哪些? 答：(1)按标记物质的种类可分为免疫荧光法、放射免疫自显影法、免疫酶标法和免疫金银法等，相应的标记物为：荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等。 (2)根据标记物是否与特异性第一抗体结合分类，可分为：①直接法：将标记物与第一抗体(一抗)结合后，直接加到细胞或组织上，在适当条件下，抗体与相应的抗原反应；②间接法：与(待检物)抗原特异性结合的第一抗体未被标记，而第二抗体(与一抗结合)以荧光素、酶或胶体金标记，有二步法(包括间接法、夹心法、补体法等)和多步法(包括桥连法)。一步法染色步骤简捷，特异性强，但敏感性较差，且标记抗体适用范围较窄；二步及多步法经抗体放大，敏感性明显提高，标记抗体可一标多用，但染色步骤多、耗时。 3．几种常用免疫组织化学方法的原理是什么? 答：(1)免疫荧光法：是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标