第二章昆虫解毒代谢PPT.ppt

1.前言 2. 初级代谢 (1) 氧化代谢（MFO) (2) 非氧化代谢 I.水解代谢（酯酶） II.还原代谢（硝基还原酶） 3. 次级代谢 4. 有毒物质在昆虫体内代谢;第一节 前言;I. 昆虫解毒代谢的类型： (1) 初级代谢（Ⅰ型反应）：主要包括对外来化合物的氧化、水解、还原以及基团的转移。 (2)次级代谢（Ⅱ型反应）：初级代谢的产物（主要具有-OH、-SH、-NH2、-COOH的基团）与内源物质（轭合剂）结合，最后排除体外。 农药在昆虫体内的轭合形式主要是氨基酸反应，包括与单氨基酸类的轭合和复氨基酸的轭合、及与硫酸酯的轭合、与谷胱甘肽的轭合、烷基化和酰化反应等。轭合后的轭合物比农药本身的亲水性更强，更容易从动物体内排出。;药物 杀虫剂 其它外来化合物;第二节 氧化代谢（MFO);（二）微粒体多功能氧化酶的组成及性质;1.细胞色素P450的特性;棉铃虫中肠细胞色素P450 CO 差光谱图;棉铃虫中肠Cyt P420-CO差光谱;(2)不稳定性;10,000g离心20min; P450s的氨基酸同源性大于40％时为同一家族；若大于55%时为同一亚家族若大于55%时为同一亚家族，大于80％属于等位基因，大于97％属于等位基因的变异体。等位基因用v1、v2等表示，假基因用p1、p2等表示。 例外 ：  CYP6A1和CYP6B2虽属于同一6家族，但是这两个蛋白的氨基酸的同源性却低于40％ ; (4)多样性; 到目前为止，p450超家族已发现1200种基因，哺乳动物中有大约310种。到2000年春季，植物中已知的p450基因有513种。细菌和低等的真核生物中的p450有接近100种已命名。人类有56种。 ;(II) P450s的进化;(III) 同工酶的多样性; 其表达与昆虫的发育阶段、性别、组织、品系及取食有关。 ;细胞色素P450基因调控的多样性?;(5) 可诱导性;槲皮素（0.01%和0.02%）对棉铃虫幼虫 P450s诱导的时间效应;单宁（0.1%和0.5%）对棉铃虫幼虫P450s诱导的时间效应; 十三烷酮(0.02%)对棉铃虫中肠细胞色素P450的诱导作用 时间 4 16 26 40 50 72 96 CK 中肠 1.50 2.29 2.24 3.07 2.58 4.32 2.58 1.22 倍数 1.22 1.87 1.84 2.51 2.11 3.53 2.11;(6) 分离昆虫p450s的方法; P450纯化可通过两个途径: (1)直接从生物体组织中分离，(2)通过分子生物学方法获得P450基因，再进行异源表达纯化P450蛋白。 从生物组织中直接分离P450蛋白一个首要解决的问题就是需要大量的组织材料.另外生物体内蛋白种类多，要经过繁琐的步骤进行分离.这样容易造成P450蛋白失活，而通过P450差光谱就很难鉴定。通过P450其它种类已分离450蛋白的抗血清或特异性抗体加以解决。;槲皮素F1;中肠或 脂肪体;分离昆虫p450s的方法;(7) 昆虫p450s的底物;2. 细胞色素P450酶系氧化底物循环作用机理;Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450;Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450;Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450;催化反应机制;P450对底物的氧化循环机理;;;;;;;;3 从p450s研究中获得信息;植物—昆虫相互作用;二、多功能氧化酶作用方式;Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450;1. O、S和N-烷基的羟基化作用（西维因的N-烷基羟基化作用）;O、S和N-烷基的羟基化作用（西维因的N-烷基羟基化作用）;Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450;;2. 脂族羟基化作用和环氧化作用;艾氏剂;NADPH,O2;NADPH;NADPH;Metabolic disorders caused by mutations and polymorphisms in P450 oxidoreductase;;;;Aldridge（1953）根据酯酶与有机磷的相互作用 把酯酶分为三类 ： ;杀虫剂的水解代谢主要包括： （一）磷酸三酯的水解 （二）羧酸的水解 （三）酰胺的水解 ;（一）磷酸三酯的水解 磷酸三酯能