高效杀草生物药剂spri-70014的研究.pdfVIP

120 开拓创新 14的研究 高效杀草生物药剂SPRI一700 顾学斌1，薛章荣‘，叶高艺2张育雷1，倪玮鞯1，陶黎明啦 (1．上海市农药研究所；2．上海南方农药研究中心) 利用微生物和生物源产生的活性物质作为新农药的研究开发正受到世界各国研究人员极大的重视。这 是因为天然物质一般来说易被自然界分解而不污染环境，而且还可以利用微生物生长繁殖所需的几乎相同 的设备条件和再生资源来生产不同的产品，能耗低、投资省。 为此上海市农药研究所通过自身的优势，长期进行微生物源农药的筛选研究，在筛选中发现70014菌 株所产生的代谢物质对杂草的生长有显著的抑制作用。为阐明它的杀草活性成分，采用了除草活性跟踪的 方法，对其发酵物进行研究，分离纯化得到了1个化合物，利用理化性质和MNR等波谱分析，鉴定出了 活性组分的结构。本文着重报道了SPRl—70014的放线菌所产活性组分的分离提取，结构鉴定及活性研究。 l材料与方法 1．1试验试剂和仪器 WRS．I ULTIMAGLOBAL A数字熔点仪(温度计未校正)；VarianINVOA400核磁共振仪；Q．TOF GAA076 LC型质谱仪；LC—AT高效液相色谱仪；Sephadex 司和青岛海洋化工厂产品。活性测试采用国家创制中心室内盆栽试验SOP所制定的生测方法。 I．2菌株的分离与培养 1．2．1产生菌株 放线菌SPRI．70014从江西新赣地区的土壤中分离得到，其发酵液对杂草的生长有显著的抑制作用。 1．2．2培养 从28。C培养4d高氏I号培养基上取适量菌体，接种于种子培养基(葡萄糖4．O％，黄豆饼粉3．0％，酵 mL r／min的条件下摇床培养2d得到种子培养液。将该种子培养液按10％的接种量，接种于400瓶每瓶含50 L。 液体培养基(成分同上)的250mL三角瓶中，28。C，220r／min摇床培养4d，发酵20 1．3活性测试 1．3．1生物活性测试方法 本文SOP所制定的生测方法进行活性跟踪。 1．3．2活性组分的确定 发酵液经过离心分离后，菌丝体用80％丙酮浸泡。酮浸泡液减压浓缩蒸干，得到浸膏，少量甲醇溶解 并加水恢复到发酵液原体积；与离心得到的上清液一起，分别稀释20倍，进行活性测定。上清液显示了 很强的杀草活性。结果表明活性组分主要集中在上清液中。取30mL上清液，分成三份，分别加入等体积 的乙酸乙酯和正丁醇萃取并测试活性。结果表明，只有正丁醇具有与上清液相应的生物活性，故确定活性 部位。 1．4提取分离 发酵液高速离心，分为上清液和菌丝体两部分。菌丝体用80％的丙酮液浸泡过夜，滤液经减压蒸馏除 去丙酮后，合并上清液共16 L，用稀盐酸调节溶液pH值约为5～6，有沉淀析出，静置过夜，过滤得上清 液。减压蒸馏浓缩至约5L，等体积的正丁醇萃取三次，提取液浓缩至浸膏状3．8 g。先采用层析法，浸膏 第八届全国农药交流会论文集 12l 拌硅胶过柱，以甲醇：氯仿梯度洗脱，收集各馏分，减压浓缩，合并、得到五个色谱部分，每个部分经活 性测试，确定其中一个为主要活性部分(A)，再经硅胶板层析、SephadexLH一20柱色谱和高效制备液相 色谱等分离手段，从A中得到化合物三个：A—I(15 mg)，A-2(23mg)，A-3(8rag)。经活性测试，确定A一2 为主要活性组分。 2结果与讨论 2．1化合物结构鉴定 化合物A一2白色粉末MS(El，)，rn／z(％)：219，246．264，282(M+)。‘H0．96(d，3H)，