免疫标记技术PPT课件.pptVIP

* 免疫标记技术 Immunolabeling technique 用荧光素、同位素或酶等示踪物质标记抗体（或抗原） 进行抗原-抗体反应。 标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变 抗体或抗原的免疫学特性，且极大的提高了反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性 或定位检测。 免疫标记技术 免疫标记技术 = 抗原抗体反应 示踪物标记 灵敏性 特异性 免疫标记技术的主要特点： 高特异性、高灵敏性 免疫技术+ 标记技术 酶 荧光素 同位素 免疫标记技术 放射物标记技术 酶标技术 免疫荧光技术 其他标记技术 酶联免疫吸附技术 酶免疫组化技术 双抗体夹心法 竞 争 法 双抗原夹心法 间 接 法 双位一点法 免疫荧光法(Immunofluorescence Technique) 用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借 此对标本中的抗原作鉴定和定位。 常用荧光素： 异硫氰酸荧光素（FITC）， 显黄绿色。 藻红蛋白（PE），显红色。 酶免疫测定（ Enzyme Immunoassay, EIA） 用酶标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将 抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相 结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。 其检测的敏感度可达pg-ng/ml水平。 Ab + E AbE Ag + AbE AgAbE + 底物（无色） 呈色反应 酶分解底物 常用酶及其底物 常用底物： 邻苯二胺(OPD)：反应显橙黄色，应避光，致癌性。 四甲基联苯胺(TMB)：反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性, 但水溶性差。 常用底物： 对硝基苯磷酸酯(p-NPP)：产物为黄色。 AP灵敏性高于HRP，但不易获得纯品，且稳定性低于HRP、价高，故应用不如HRP普及。 1.辣根过氧化物酶(HRP) 2.碱性磷酸酶(AP) 基本特点： ①标记后保留酶和抗原(抗体)的活性； ②酶促反应专一性，保证特异性； ③底物反应放大作用，提高敏感性； ④酶标试剂保存稳定； ⑤操作简便，安全易行。 常用方法: 酶联免疫吸附试验 (Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA) 将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应 板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相 中游离成分洗除. 用于可溶性抗原或抗体的检测。 * 间接法：用于检测抗体 wash wash wash *双抗体夹心法：用于检测抗原 放射免疫测定法（RIA） 利用放射性核素的测量方法与免疫反应的基本原理相结合的一种放射性核素体外检测法。该法有灵敏度高（可达pg水平）、特异性强、精确度佳及样品用量少等优点。常用于微量物质的检测，如激素、IgE等。 常用放射性核素： 3H、 14C 、32P—液体闪烁计数器 125I、131I 、51Cr、60Co---γ计数器 1. ELISA检测HBsAg (小组做) 实验内容 3. 免疫标记技术 (录像) 2. 尿液HCG检测(胶体金法)(小组做) 实验目的 1.掌握酶联免疫吸附实验的基本原理； 2.了解利用双抗体夹心法测定HBsAg的方法。 3. 了解胶体金法检测HCG的原理、方法。 实验材料 1.HBV诊断试剂盒； 2.HBsAg阳性对照品，阴性对照品，待检品。 一、双抗体夹心法检测HBsAg 实验材料 1.HBV诊断试剂盒； 2.HBsAg阳性对照品，阴性对照品，待检品。 HBV感染后的血清学指标: HBsAg, HBsAb HBeAg, HBeAb HBcAb(IgG,IgM) 乙肝表面抗原,存在于HBV感染的急性期及慢性期的血清中,为感染指标。 实验步骤 2. 在各孔内加入酶标抗体1滴, 37℃温育30分钟。 3. 各孔分别加入洗涤液(加满)---甩掉，反复3次，然后在吸水纸上吸干(倒扣在吸水纸上)。 4. 各孔内加入底物液A、B各1滴，轻轻摇动混匀，室温避光反应15分钟。 5. 各孔内加入终止液1滴，观察结果。 1. 将已包被的孔编号，分别加入阳性对照血清、阴性对照血清及待测血清各1滴。 结果判定 2.若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为阳性； 3.若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对