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大蒜中可溶性多糖的提取分离与检测 指导老师：蒋开军 班级：生物工程0702 学生：叶玉平 学号：200706030221 大蒜中多糖的种类及结构 多糖是指由10个以上的单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子聚合物，可以包括几百甚至几千个单糖分子。在多糖结构中除含单糖外，有时还含有糖醛酸、糖醇、氨基糖等，甚至别的其他取代基团。 大蒜多糖主要含85.0%的果糖，分子量9000-10000道尔顿，分子度为9。果聚糖结构以β-2-1连接为主，带少量的2~ 6支链的短片段聚糖；聚合度一般平均为58，属于新蔗果三糖类果聚糖；其终端为葡萄糖单位，分子式为GFn，其中G为终端葡萄糖单位，F代表果糖分子，n则代表果糖单位数。另外大蒜多糖还含14.0%葡萄糖和1.0%半乳糖的杂多糖。果糖、葡萄糖的糖苷键为β-糖苷键. 研究的目的及意义 目的：在于通过实验得出热水浸提法提取大蒜中的多糖的最佳工艺参数。 意义：本实验根据大蒜多糖自身的特点，在现有的实验条件下，采用热水浸提法提取大蒜中的多糖，再通过合适的纯化、鉴定方法，从而可以得到比较纯的大蒜多糖，因此可以为进一步的理论研究和应用提供合格的样品。 实验方法 提取方法：热水浸提法。研究提取温度、料水比、提取时 间对大蒜粗多糖提取率的影响。 含量测定：硫酸-苯酚法。 定性分析：提取液中加入硫酸和苯酚进行反应。 纯化路线：果胶类物质去除—Sevag法除蛋白—纤维素柱 层析纯化。 葡萄糖标准曲线的制定 图1 葡萄糖标准曲线 利用葡萄糖标准品配制的标准液，用紫外分光光度计于490nm的波长下测定其吸光度，从而得到标准曲线。线性方程为A=0.0011+0.0039C1 。 因此大蒜多糖的提取率=M2/M1×100% M2=C×V=0.9×K1×K2×A×V 料水比单因素实验 图3 料水比单因素实验 由图3可以看到当用水量增 大时，粗多糖提取率也提高1:7时达到最高，且与后面的提取率基本平行。一般说来，料液比越高提取率也较高，但料液比增加，成本增加，在保证提取效果的同时，应减少水的用量和降低蒸发浓缩负荷，因此料液比选择1:7。 提取时间单因素实验 图4 提取时间单因素实验 从图4中可以看出 ，随着提 取时间的延长，粗多糖的提取率 呈上升趋势，在180min左右提取 率达到较高值，随后再延长提取 时间，提取率趋于平缓，说明大蒜中多糖基本提取完毕，为缩短工时节省能源，选择180min为提取时间。 提取次数对多糖提取率的影响 图5 提取次数对多糖提取率的影响 由图5可看出，提取两次已能够绝大部分大蒜多糖提取出来，考虑到随着提取次数的增大，提取液中多糖的浓度急剧降低，这会导致生产周期和操作费用的增加，浓缩时间过长也有可能降低多糖的活性，故进行综合考虑，一般不考虑提取次数这一影响因素。 大蒜多糖纯度鉴定 大蒜多糖经去除果胶类物质，Sevag除蛋白，再经纤维素层析柱纯化，最后上样于Sephadex G100柱以检查其纯度，用蒸馏水洗脱的流出曲线见图6。图洗脱峰单一对称，显示样品为均一多糖，即大蒜多糖已被纯化。 图6 大蒜多糖的纯度鉴定 热水浸提法提取大蒜中多糖的最佳参数 经过单因素实验，利用热水浸提法从大蒜中提取多糖的最佳工艺参数为：提取温度为80℃，料水比1:7，提取时间为180min。称取2.00g脱脂蒜粉，按最佳工艺参数进行提取，最后于490nm波长下测定其吸光度，计算其提取率。 提取温度（℃） 物料比 提取时间（min） 吸光度 80 1:7 180 0.781 验证实验所测得的A（吸光度）值为0.781 根据线性回归方程：A=0.0011+0.0039C1 2g脱脂蒜粉中提取的多糖含量为：0.1440g 提取率为7.2%