常规组织病理技术PPT.ppt

常规组织病理技术;概述 高、新技术在病理领域的运用只能拓宽病理工作者的视野，丰富病理研究工作的内容，在一定程度上提高疾病诊断的准确性。病理工作最基本、最重要的技术仍然是常规组织病理技术，离开它，一切病理诊断和研究都无从谈起。; 第一节 组织与细胞的取材 一张好的切片与组织取材、固定、染色有密切的关系。正确的取材、合适的固定和良好的染色是优质病理工作的基础。; 为适应新技术的开展，要求所需材料，不仅要①组织细胞的形态完整保存；而且要②最大限度保存组织或细胞成分的抗原性；还要求③抗原不弥散，以保证其准确定位。这就为取材和固定提出了更高要求。 ; 一、组织取材 （一）一般原则 1、厚度 0.2～0.3cm；面积 1 ～ 1.5cm2。 2、皮肤、腔道器官及囊壁组织等应 剪成 细条，如过长可将其缠绕成 同心圆状。 ;（二）、取材注意事项 1、刀剪应锋利、避免前后拉动和 挤压。 2、避免使用有齿镊，动作轻柔以 免挫伤或挤压组织。 ;3、应避开坏死组织和血凝块，去掉 异物。 4、应取病变主体、病变与正常交界 和正常组织各一块。 ;二、细胞取材及制片 1、印片法：操作简单、细胞抗原 保存完好。 2、穿刺法：直接涂片或离心后涂 片。 3、沉淀法：先离心后涂片。 ;4、活细胞标本制备：将细胞直接培养 在盖玻片上（细胞爬片），或培养 于培养瓶或培养板内，制成细胞悬 液，再涂片。 ; 第二节 固定及常用固定剂 一、概念：将组织浸入某些化学试 剂，使细胞内的物质能尽量保 持其生活状态时的形态结构和 位置，这 一过程称之。 二、固定的作用 ;1、保持组织、细胞与生活时相似的 结构和形态，防止离体组织自溶 和细菌繁殖导致的组织腐败。 2、保持定位细胞内特殊的成分，如 细胞内的一些蛋白质经过固定， 可沉淀或凝固定位在细胞的原有 部位。 ;3、固定可使组织细胞中各种成分沉淀 、凝固并易着色，便于区别不同的 组织成分。 4、固定剂兼有组织硬化的作用，能使 细胞从半液体状（溶胶）变为固定 状（凝胶）有利于切片。 ;5、有利于保存抗原及DNA、RNA， 为免疫组化染色和核酸原位杂交 做准备。 ;三、组织固定的注意事项 1、取材后要及时固定，尤其是温度高 的季节，以免腐败。 2、容器：最好选择广口的容器，一是 避免组织受挤压变形，二是方便取 材时易于取出。 3、固定液要足量，至少应为组织块总 体的5倍以上。 ;4、根据不同研究目的选择不同的固定 液。如做Masson染色，最好用甲 醛升汞、Zenker液或bouin液固 定；保存细胞内糖原应选用Carnoy 液固定；显示尿酸盐结晶可用100% 酒精固定。 ;5、固定时间：视组织块大小、固定温 度、固定液种类而定。一般固定3 小时以上，然后保存于70%酒精中。 温度低于40C时，固定时间应延长 （但不能太长） 。大标本除延长固 定时间外，还应做多个切面固定， 以免固定不均匀。;四、固定方法 1、浸泡法。 2、蒸汽固定法：常用于固定组织中 的可溶性物质。 3、注射灌注固定法：用于组织块过 大或固定剂难以进入其内部的标 本（如整个器官、整只动物）。 ; 4、滴加法：细胞涂片。 5、微波固定法（63～650C）：具有 核膜清晰、染色质均匀、组织结 构收缩小等优点，但由于其固定 时间不易掌握，多不主张运用于 小组织块固定。; 五、常用固定液及其配制 （一）单纯固定液：由单一化学物质 组成。 1、甲醛 （1）优点：价格便宜、组织穿透力强、 固定均匀、组织收缩小，可长期 保存标本。 （2）缺点：易挥发，有一定毒性。 ;（2）性质：交联性组织固定剂，主要 通过使蛋