10 化学发光与生物发光检测技术.ppt

化学发光与生物发光 罗昭锋 2006/10/10 分子发光 荧光 磷光 化学发光 生物发光 荧光与磷光的根本区别 荧光是由激发单重态最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的； 磷光是由激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的。 在单重激发态中，两个电子平行自旋，单重态分子具有抗磁性，其激发态的平均寿命大约为10-8s，而三重态分子具有顺磁性，其激发态的平均寿命为10-4 ~ 1s以上（通常用S和T分别表示单重态和三重态） 激发光谱曲线和荧光、磷光光谱曲线 荧光和磷光均为光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，可根据它们的激发光谱曲线来确定。绘制激发光谱曲线时，固定测量波长为荧光（或磷光）最大发射波长，然后改变激发波长，根据所测得的荧光（磷光）强度与激发光波长的关系，即可绘制 激发光谱曲线。 荧光和分子结构的关系 分子产生荧光必须具备两个条件： ① 分子必须具有与所照射的辐射频率相适应的结构，才能吸收激发光； ② 吸收了与其本身特征频率相同的能量之后，必须具有一定的荧光量子产率。 磷光分析法 与荧光相比，磷光具有如下三个特点： 1、磷光辐射的波长比荧光长 分子的T1态能量比S1态低。 2、磷光的寿命比荧光长 由于荧光是S1 ? S0跃迁产生的，这种跃迁是自旋许可的跃迁，因而S1态的辐射寿命通常在10-7~ 10-9s，磷光是T1 ? S0跃迁产生的，这种跃迁属自旋禁阻的跃迁，其速率常数要小，因而辐射寿命要长，大约为10-4~ 10s， 3、磷光的寿命和辐射强度对于重原子和顺磁性离子敏感 Bioluminescence Biological Fluorescence These are two distinctly separate processes where visible light is emitted from living species. Bioluminescence is the emission of visible light either voluntarily or involuntarily. Bioluminescence is light produced by a chemical reaction within an organism. Fluorescence is the involuntary emission of light when an organism is being subjected to ultraviolet light. 化学发光分析 化学发光 某些物质在进行化学反应时，由于吸收了反应时产生的化学能，而使反应产物分子激发至激发态，受激分子由激发态回到基态时，便发出一定波长的光。这种吸收化学能使分子发光的过程称为化学发光。 化学发光分析法 利用化学发光反应而建立起来的分析方法称为化学发光分析法。 生物发光 化学发光也发生于生命体系，这种发光称为生物发光。 发光的条件 反应必须提供足够的能量（170 ～ 300KJ ／ mol ） 这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的荧光量子产率。 到目前为止，所研究的化学发光反应大多为氧化还原反应，且多为液相化学发光反应。 化学发光是吸收化学反应过程产生的化学能，而使反应产物分子激发所发射的光。任何一个化学发光反应都应包括化学激发和发光两个步骤，必须满足如下条件： （1）化学反应必须提供足够的激发能，激发能主要来源于反应焓。 （2）要有有利的化学反应历程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态。 （3）激发态能释放光子或能够转移它的能量给另一个分子，而使该分子激发，然后以辐射光子的形式回到基态。 化学发光反应效率?cl，又称化学发光的总量子产率。它决定于生成激发态产物分子的化学激发效率?ce和激发态分子的发射效率?em。定义为： ?cl =发射光子的分子数 / 参加反应的分子数= ?ce??em 化学反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由参加反应物质的化学反应所决定。每个化学发光反应都有其特征的化学发光光谱及不同的化学发光效率。 化学发光反应的发光强度Icl以单位时间内发射的光子数表示。它与化学发光反应的速率有关，而反应速率又与反应分子浓度有关。即 Icl （t）= ?cl ? dc/dt 式中 Icl（t）表示t时刻的化学发光强度，是与分析物有关的化学发光效率dc/dt是分析物参加反应的速率。 化学发光反应的发光效率 是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。 对于一般化学发光反应，值约为 10 -6 ; 较典型的发光剂，如鲁米诺，发光