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正交试验法优选菟丝子总黄酮提取工艺 更新日期：2010-06-09 点击： 郭　澄　张　纯　邵元福　郑　越 提要　用正交实验法对菟丝子中总黄酮的提取工艺进行了探讨。实验确定的最佳提取条件为：用8倍量95%乙醇回流提取6 h。 　　关键词　正交试验；　菟丝子总黄酮；　提取工艺 Orthogonal Test for the Effect of Alcohol Extracting Process to Total Flavones Contents from Cuscuta Seeds Guo Cheng, Zhang Chun, Shao Yuanfu, et al Changzheng Hospital, SMMU, Shanghai 200003 Abstract　Concentration of alcohol, reflowing time and amount of alcohol were tested in orthogonal analysis for alcohol extracting process. Experimental results showed that concentration of alcohol was the significant fact to total flavone content with P＜0.05. The best extracting process can be described as: the drug powder is reflowed 2 times, 3hrs each, 95% alcohol with 8 times of the amount to drug weight. 　　key words　Orthgonal test;　Cuscuta australis;　Extracting techniques 　　中药菟丝子为临床常用壮阳类中药，具有滋补肝肾、益精明目等功效。菟丝子类生药含有黄酮、多糖和甾醇等成分［1，2］，具有多方面的补益活性(郭澄，第二军医大学博士学位论文，1993)［3，4］，其中黄酮类成分为主要的有效成分。本文采取正交设计试验优选菟丝子类药材的主流品种南方菟丝子中总黄酮的提取工艺。 1　实验材料 　　药材与试剂：菟丝子药材(购自上海市黄浦区药材公司，经郭澄鉴定为南方菟丝子Cuscuta australis R. Br.)，芦丁对照品(购自中国药品生物制品检定所)；岛津UV-240紫外分光光度仪。 2　方法与结果 2.1　提取工艺的设计：先将生药粉碎成粉末，过40目筛，用石油醚加热回流脱脂2 h，挥干石油醚，残渣以一定浓度的乙醇回流提取，分2次进行，合并提取液，定容，待测。另精称0.5 g药材粉末置索氏提取器中加100 ml石油醚回流脱脂2 h，再用90 ml甲醇提取3 h，置100 ml容量瓶定容，待测。 2.2　正交设计：根据生产实际及文献［5］，认为总黄酮成分提取与乙醇浓度(A)、倍数(B)、提取时间(C)有关，故选择该三者为3个考察因素，各取3个水平，进行L9(34)正交表实验，见表1。每次试验药材用量为50 g，以500 ml容量瓶定容液中总黄酮浓度为指标。 表1　正交因素水平表 水平 乙醇浓度 A (%) 用量 B (倍) 时间 C (h) 1 50 8 2 2 70 12 4 3 95 16 6 2.3　总黄酮含量测定及结果：按文献方法［6］用芦丁作对照品，以吸收度 A为纵坐标，浓度 C (μg/ml)为横坐标，得回归方程(5.5～44 μg/ml线性范围)： C=80.258 A＋0.452， γ=0.9991。药材提取供试液中总黄酮浓度(以500 ml定容提取液浓度计)直观分析表、方差分析表分别见表2、表3。 表2　直观分析表 序号 因　素 总黄酮含量 (μg/ml) A B C 1 1 1 1 753.796　 2 1 2 2 1037.254　 3 1 3 3 934.702　 4 2 1 2 1377.483　 5 2 2 3 1395.042　 6 2 3 1 1029.883　 7 3 1 3 1456.250　 8 3 2 1 1226.950　 9 3 3 2 1169.797　 K1 2725.752 3587.529 3010.629 　 K2 3802.408 3659.246 3584.534 　 K3 3852.997 3134.382 3785.994 　 K1 　905.504 1195.843 1003.543 　 K2 1267.469 1219.749 1194.845 　 K3 1284.3