25-病毒感染的检查方法与防治原则PPT.pptVIP

③传代细胞系 (continuous cell line ) 特点: ? 对多种病毒敏感性高 ? 繁殖能力强,传代时间长 ? 有致癌危险(来源于癌细胞或突变的二倍体细胞株) 应用: ? 病毒分离与鉴定 ? 病毒学实验研究 ? 不能用于制备疫苗 能在体外无限传代的细胞系。如 HeLa, Hep-2 epithelioid cells 4. 病毒的分离培养与鉴定 : ? 病毒的分离培养 ? 病毒的鉴定 ? 病毒数量及感染性测定 病毒鉴定： ? 病毒在细胞中增殖的指标 ? 病毒形态学鉴定 ? 病毒抗原鉴定 ? 病毒基因鉴定 ⑴ 细胞病变效应 ( cytopathic effect, CPE) 病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下可见的细胞病理改变。 ①CPE：病毒感染细胞发生形态改变 Syncytium formation in cell culture caused by RSV (top), and measles virus (bottom). ②CPE：病毒感染细 胞与邻近细胞融合 ③CPE：形成包涵体（inclusion body） Syncytial formation caused by mumps virus and haemadsorption of erythrocytes onto the surface of the cell sheet. ⑵ 红细胞吸附（hemadsorption, HAd） 受染细胞膜表面血凝素（HA）＋ RBC表面HA受体 ⑶ 干扰现象（interference） 风疹病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE（－） 埃可病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE（＋） ＋人胚肾细胞 风疹病毒？ 埃可病毒 CPE(-)——埃可病毒(-) 风疹病毒(+) CPE(+)——埃可病毒(+) 风疹病毒(-) * * * 第25章 病毒感染的检查方法与防治原则 内 容 第一节 病毒感染的诊断(检查方法） 第二节 病毒感染的特异性预防(自学） 第三节 病毒感染的治疗（自学） 第一节 病毒感染的诊断 （Diagnosis of viral infection） ? 标本采集与送检原则 ? 病毒感染的检查方法 一、标本采集与送检原则 ? 按疾病种类与病程采取不同标本 ? 在发病早期与用药之前采取标本 ? 无菌操作，有菌标本用“双抗”（青、链霉素）或 “三抗”（青、链霉素+两性霉素B）处理 ? 冷藏速送，病变组织用50％甘油保存 ? 血清学检测：IgM —单份血清, IgG —双份血清 二、检查方法 ? 病毒的形态学检查 ? 病毒的血清学检查 ? 病毒的分子生物学检查 ? 病毒的分离培养与鉴定 快速诊断 1. 病毒形态学检查 电子显微镜：可观察各种病毒的形态 但设备贵、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可观察大病毒（痘病毒）和包涵体 对一般病毒检测意义不大 Inclusion body Cytomegalic cell that contains a dense, owls eye, acidophilic intranuclear inclusion body Negry body 2. 病毒血清学检查 ? 已知抗原—测抗体（诊断） ? 已知抗体—测抗原（鉴定病毒属、种、 型、亚型） (1) 中和试验(Neutralization test) (2) 血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition test) (3) 免疫标记法(FIA、EIA、RIA) (4) 蛋白印迹(Western blot) 2. 病毒血清学检查 方法： Immunofluorescense test Immunofluorescense test Positive immunofluorescence test for rabies virus antigen. (Source: CDC) HEL细胞中CMV IE1蛋白的表达 Enzyme immunoassay (EIA) ELISA Coloured wells indicate reactivity AIDS的确诊试验 Western blot 3. 病毒分子生物学检查 ? 可用于检测常规培养系统不能培养的病毒 ? 可用于检测少量标本或含少量病毒的标本 ? 可用于抗体产生前或不能产生抗体的免疫缺陷患者检测