[临床医学]术前筛查自动化检测的临床应用.pptVIP

手术/输血前筛查 1. Ab ＋ Ag ? Ab ? Ag （b复合物） 2. Ab ? Ag＋Ab* ? Ab ? Ag ? Ab* （a复合物） Ab＋Ag＋Ab*? Ab ? Ag ? Ab* ＋Ab ? Ag ＋Ag ? Ab*＋Ab* ? Ag ? Ab*  a b c d ELISA反应原理 ELISA既可用于测定抗原，又可用于测定抗体。本法有三个必要的试剂：①固相化的抗原或抗体；②酶标记的抗原或抗体；③酶反应的底物。根据其测定抗原和抗体的不同采取不同的测定方法。在测定抗原时，蛋白大分子抗原大多采用双抗体夹心法，而对于只有单个抗原决定簇的小分子，则采用竞争法；测定抗体通常采用间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法。 （一）检测抗原的方法： 1.双抗体夹心法 属于非竞争结合测定，是检测抗原最常用的方法，适用于检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原。其基本原理是先将特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体；加入待测标本并温育，使标本中的抗原与固相抗体充分反应，形成固相抗体抗原复合物，洗涤除去其他游离成分；然后加入酶标记抗体并温育，形成固相抗体抗原复合物与酶标记抗体结合，形成固相抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物（双抗体夹心），洗涤除去游离酶标记抗体；加底物，固相载体结合的酶可催化底物成为有色产物，根据产物的显色程度进行抗原的定性或定量检测。 经典的双抗体夹心法，均采用两步法，即待测标本与酶标记抗体分开加入反应体系，两步温育。如果血清标本中有类风湿因子（RF）存在，则可出现假阳性反应，因为RF是一种抗变性IgG的自身抗体，它能与多种动物的变性IgG的Fc段结合，因此待测标本中含有RF时，RF就可作为固相抗体和酶标记抗体（均为IgG）之间的桥联物，分别与固相抗体和酶标记抗体的Fc段结合，从而产生假阳性反应。双抗体夹心法只适用于二价或二价以上的较大分子抗原的测定，不能用于小分子半抗原的检测。双抗体夹心法在临床上常用于乙型肝炎表面抗原、 2．双位点一步法 在双抗体夹心法基础上，进一步发展了双位点一步法。该法是针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的抗原决定簇，分别制备两种单克隆抗体，在包被时使用一种单抗，酶标记时使用另一种单抗。测定时将含待测抗原标本和酶标记抗体同时加入反应体系，两种抗体分别与不同的抗原决定簇结合，只进行一次温育，在洗涤后即可加入底物进行显色测定。但当待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标记抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应（hook effect）显色降低，严重时可出现假阴性结果。必要时可将标本适当稀释后重新测定。 检测抗体的方法 1. 间接法 检测抗体最常用的方法，属非竞争性结合试验。其原理是将抗原包被在固相载体上，加入待测样本，使样本中待测抗体与固相载体上的抗原结合形成固相抗原-待测抗体复合物，经温育洗涤后，加入酶标记抗抗体（亦称为酶标二抗），它是针对待测抗体的抗体，临床常用酶标记羊抗人IgG，经温育洗涤后，在固相载体上形成固相抗原-待测抗体-酶标二抗复合物，加入底物后根据显色的深浅确定待测抗体的含量。 间接法由于采用的酶标二抗仅针对免疫球蛋白的一种类别，且通常用的是抗人IgG，因此检测的抗体类别为IgG，不涉及IgA和IgM。此外，该法只需更换固相抗原，就可用一种酶标二抗检测标本中多种针对不同抗原的抗体，具有更好的通用性。但此法由于受血清中高浓度非特异性IgG的干扰，通常待测标本需经一定稀释后才能测定。 2. 双抗原夹心法 由于双抗原夹心法可检测某种特定抗体的所有类别Ig，而且不受非特异性IgG的干扰，因此双抗原夹心法的灵敏度和特异性要高于间接法。其原理类似双抗体夹心法，操作步骤也基本相同，也可采用一步法，只不过由于机体产生抗体的量有限，一般不会出现钩状效应。临床上乙型肝炎表面抗体的测定常用此法。 HBV检测 乙型肝炎的危害性 WHO估计：2000年全球慢性HBV感染达4000万， 全球因乙肝死亡数100万/年 慢性HBV感染是引起肝硬化和肝细胞癌的最主要原因 肝癌(HCC)在HBV感染者的发病率是正常人群的1000倍(江苏启东，广西龙安) 30～40%肝硬化病人的尸检是HCC，而90%HCC的发生在肝硬化的基础上 我国每年有数以万计的人死于肝硬化和HCC 乙肝病毒传播途径(中国) 血液传播 药瘾者感染 母婴传播: 垂直、围产和水平传播 日常生活和性传播 乙肝病毒传播途径(中国) 医源性感染 科室分布: 消化、感染