优化仪器设置和测量参数.PDFVIP

微孔板仪器 优化仪器设置和测量参数 进行荧光和化学发光的动 在动力学测量中，仪器设置 力学测量 和测量参数取决于荧光和化 学发光的反应速度，正确的 原文：AppliReija-Riitta Harinen, Jorma Lampinen, Marika Raitio. Thermo Fisher Scientific Oy, Vantaa, Finland. 编译：俞立超 设置是进行成功实验的关 键。本文列举了过氧化氢 / 过 氧化物酶检测（荧光法）、ATP 在酶标仪上进行荧光和化学发光测量的优势在于可进行高通量的测量。为了获得最佳的 检测（化学发光法）、钙离子 实验结果，反应的动力学速度将决定所需仪器的必备条件和测量参数的设置。如果需要通过向 检测（化学发光法）三种类型 微孔板中加入试剂开始反应，那么选择手工加入试剂（如移液枪），还是使用自动进样器分液， 的动力学实验，通过这些实 这取决于该反应的速度。如果加入试剂后，反应的荧光或化学发光信号迅速上升，达到峰值后 例来展示如何根据反应速度 迅速下降，那就意味着手工加样不能满足检测的需要。这是因为加样后检测的时间延迟会降低 来选择仪器设置和测量参数 反应的检测灵敏度，因此具有快速动力学特点的反应必须在配备有自动进样器的仪器上进行。 的方法。 特别的，如果反应速度极快，这就要求仪器不仅需要自动进样器，而且分液位与测量位必须在 同一位置，只有这样才能保证实时跟踪反应的进程。 在一些动力学测量中，往往要求在加入试剂开始反应前先测量一段基线信号。对于这样 的应用，用户必须能够对动力学测量过程进行设置，使得分液可以在动力学测量的特定时间 点进行。 对于在微孔板上进行的动力学实验，根据需要选择进行“整板”、“单孔”或“组”（多个孔）进 行测量十分关键。如果属于快速动力学反应，那么必须在完成第一个孔中的所有操作步骤（如 分液后读数）后才能继续下一个孔的测量，即以“单孔”的方式进行实验。否则，当测量其它孔 时，会损失信号强度，或将无法获得正确的动力学起飞点数据。而如果动力学之间的间隔时间 足够长，那么可以将试剂先预分至所有孔中，然后以“整板”的方式进行测量。当然，也可以根据 反应速度，选择多个孔构成一组，以“组”的方式进行。 分液器的设置也是十分重要的。在软件中必须能够对分液速度进行优化，粘度越大的液 体需要更快的分液速度。优化的分液速度还能保证所加入的试剂与孔中原有溶液之间的充 分混合。如果分液速度过低，将导致孔内溶液的混合效果不好，而速度过快，试剂就有可能溅 出孔外。 在当前的一些应用中，常常包括了多个分液步骤，这就要求仪器具有配备多个自动进样器 的能力。例如，双报告基因检测系统 DLR（Promega, USA）需要两步的试剂分液，因而二个自 动进样器对于 DLR 实验而言是必须的。 材料与方法 个时间点加入 50μl 浓度为 10μM 的 H2O2 激 所 有 的 荧 光 和 化 学 发 光 实 验 都 在 活反应。 Varioskan Flash 全 波 长 多