[理学]色谱基本分离模式2.ppt

简介 毛细管电泳的基本原理及特点 仪器流程及主要部件 毛细管电泳的分离模式 CE相关技术 毛细管电泳的应用与发展动向 毛细管电泳发展趋势 经典电泳分析 毛细管电泳分析 traditional electrophoresis capillary electrophoresis 二、毛细管电泳基本原理 Basic principles of CE 电渗现象与电渗流 2. CE中的电渗现象与电渗流 3. CE中电渗流的大小与方向 CE中电渗流的方向 4. CE中电渗流的流形 5. CE中电渗流的作用 CE中影响电渗流的因素 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响 淌度 Mobility CE中的参数与关系式 3.分离度 影响分离效率的因素—区带展宽 3.焦耳热与温度梯度的影响 4.溶质与管壁间的相互作用 5.其他影响因素 三、仪器流程与主要部件 1.高压电源 毛细管结构 3.缓冲液池 毛细管电泳的进样方式 2. 电动进样方式 一）离子分析 analysis of ion 阴离子分析 二）药物分析 analysis of pharmaceutics 三）手性化合物分析 analysis of chiral compounds 四）氨基酸与蛋白质分析 analysis of amino acids 五）核酸分析及DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA 六、新进展advances and special topics 6).其它检测器 采用激光作激励源的除LIF外，还有激光热透镜检测、激光光热检测和激光拉曼检测等。 普通荧光检测器研究集中在开发新的荧光染料，以提高灵敏度。 同位素检测器具有高选择性和高灵敏度〔可达10-9加mol/L〕，但测定时需经同位素标记步骤，故应用受到限制。 检测器是CE中具有挑战性的研究工作。 CE/MS联用是最有应用价值的检测器，但价格昂贵，不易推广。 发展新型检测器、提高UV等检测器灵敏度，以及发展CE和其它分离方法、检测方法的联用是CE研究重点之一。 六 毛细管电泳的应用与发展动向 一）离子分析二）药物分析 三）手性化合物分析四）氨基酸与蛋白质分析五）核酸分析及DNA排序六）单细胞单分子分析 阳离子分析 迁移方向和电渗流方向一致； 4.5min内分离了24种金属离子； 阳极进样，阴极检测； 具有很高的灵敏度； 阴离子电泳方向和电渗流方向相反、速度接近，分析时间长、效率低； 质量小、电荷密度大的离子如：SO4-2、Cl-、F-等，电泳速率大于电渗流，阳极端流出，在阴极端无法检测； 加入电渗流改性剂，十六烷基三甲基溴化胺等，使电泳方向和电渗流方向一致，可在3.1min内分离36种阴离子；阴极进样，阳极检测； 离子价态及存在形态分析； 检测体液或细胞中某些代谢产物的分析； 尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段； 采用毛细管区带电泳方式，在11min内分离17种药物； 采用MEKC模式，鉴定违禁药物；效果优于HPLG法 合成获得单一手性化合物相当困难；528种手性合成药物，61中以单一对映体形式销售，其他为外消旋体；检测分析也相当困难；研究热点； R-反应停是安眠药，S-式致胎儿畸形； CE分离分析手性化合物的方法：加入手性选择剂； 形成配合物的稳定常数有差异，结合CE的高效率； 常用手性选择剂：环糊精及其衍生物；手性冠醚；手性表面活性剂（氨基酸衍生物、胆酸钠、牛磺脱氧胆酸及其钠盐、低聚糖等天然手性表面活性剂） 采用MEKC模式，在25分钟内分离了23种丹酰化氨基酸； CE可取代传统的氨基酸分析仪； 问题：吸附和检测； 蛋白质组学 对蛋白质特别是对其结构和功能的大规模研究，其实质就是在细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和鉴定。 蛋白质组的研究能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。 通过对正常个体及病理个体间的蛋白质组比较分析,找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”: 作为新药物设计的分子靶点 为疾病的早期诊断提供分子标志 蛋白质 肽片段混合物 酶切 CZE 分离 特征性肽图 微量制备 CE 分别测定各片段的氨基酸序列 整个蛋白质 的一级结构 CE是蛋白质组学研究中最有效的分离蛋白质或多肽的方法 DNA分析包括碱基、核苷、核苷酸、寡核苷酸、引物、探针、单链DNA、双链DNA(DNA片段、PCR产物)分析及DNA序列测定。 已有CE测定DNA序列的商品仪器面市。 图，酶解的双螺旋DNA限制性片段的分离； 1000-C