[生物学]生物分子的分离纯化-2012.ppt

（1）分离纯化方法千差万别，没有一种标准方法可通用于各种生物大分子的分离制备； （2）制备几乎都是在溶液中进行的，难以准确估计和判断pH值、温度度等各种参数对溶液中各种组份的综合影响 生物大分子制备的一般步骤： 制备生物大分子的分离纯化方法多种多样，主要是利用它们之间理化性质的差异。 核酸的浓缩、沉淀与洗涤 随着提取试剂的逐步加入，去除杂质时的丢失，样品中核酸的浓度会逐步下降，当不能满足后续研究与诊断所需时应对样品进行浓缩。 沉淀是浓缩核酸的最常用且高效的方法， 优点： ①改变核酸的溶解缓冲液； ②重新调整核酸的浓度； ③去除溶液中某些盐离子与杂质。 核酸的鉴定与保存 （一）核酸的鉴定 1. 浓度鉴定 核酸浓度的测定可通过紫外分光光度法与荧光光度法进行。 ⑴ 紫外分光光度法：该法是基于核酸分子中的碱基具有共轭双键结构因而可以吸收紫外线，其最大吸收波长为260nm，这一物理特性。 ⒉ 纯度鉴定 紫外分光光度法或荧光光度法皆可用于核酸制品的纯度鉴定。 ⑴　紫外分光光度法：该法主要通过A260与A280的比值来判定有无蛋白质的污染。在TE缓冲液中，纯DNA的A260/A280为1.8，纯RNA的比值为2.0。比值升高与降低均提示不纯。 ⑵　荧光光度法：用EB等荧光染料示踪的核酸电泳结果可判定核酸制品的纯度。DNA分子较RNA大得多，电泳迁移率