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免疫学技术在食品安全检测中的应用 组员： 小组成员分工 资料搜索： PPT制作： 后期审阅： 所选论文：《免疫学技术在食品安全检测中的应用》 论文作者：郎需龙 刘文森 王兴龙 作者所在单位： 解放军军事医学科学院 军事兽医研究所动物性食品安全研究室 论文发表日期：2009年5月25日 本小组所选的论文中一共提到8种免疫学技术，但其中只有4种是我们学过的，因此本次的PPT汇报中仅列出了学过的4项。 免疫荧光技术 论文中提及的检测技术 酶联免疫吸附实验 免疫芯片 免疫传感器技术 酶联免疫吸附实验(ELISA) 酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)，是将可溶性抗原（抗体）吸附到某种固相载体表面，并保持抗原（抗体）免疫活性，这样在与标本中的抗体（抗原）反应后，只需经过固相洗涤的洗涤，就可以达到抗原抗体复合物与其他物质分离，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 试验操作图和试验专用仪器 ELISA法在食品安全监测中的应用 1977年LaWell首先采用了ELISA法来检测了黄曲霉毒素，目前食品中许多致病菌如沙门氏菌、大肠杆菌O157等微生物都可用此方法来进行检测。另外主要的药物残留如抗生素类，碘胺药类、呋喃类、抗球虫类，激素药类和驱虫药类等的ELISA检测方法都已经建立。其中T-2毒素、黄曲霉毒素B1、脱氧雪腐镰刀烯醇等的ELISA检测方法已列入我国标准方法。基于ELISA方法的检测抗生素、农药、食品添加剂等的残留检测试剂盒已经实现了产业化。 单击此处添加标题 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法 间接法 间接法是检测抗体最常用的方法，将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗体）与之结合形成固体抗原复合物。洗涤后，计入酶标二抗与故乡复合物中的抗体结合，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。最后加酶的底物显色，终止反应后，目测性或用酶标仪测光密度值测定，颜色的深度与标本中受检抗体的量成正比。 双抗体夹心法 双抗体夹心法常用于测定大分子及颗粒多价抗原。将已知抗体A吸附于固相载体上，加入待检标本（喊相应抗原）与之结合形成固相抗体-A-抗原复合物。温育后洗涤，加入酶标抗体B形成固相抗体-A-抗原-酶标抗体B夹心式复合物，固相载体上带有的酶量与标本中待测物质量成正比。最后加入底物，夹心式复合物的酶催化底物成为有色产物，颜色的深度与抗原的量成正比。 竞争法 将抗原连接到固相载体上，样品中待测抗体与之结合成固相抗原-受检抗体复合物，再用酶标二抗(针对受检抗体的抗体，如羊抗人IgG抗体)与固相免疫复合物中的抗体结合，形成固相抗原-受检抗体-酶标二抗复合物，测定加底物后的显色程度，确定待测抗体含量。 捕获法 捕获法（亦称反向间接法）ELISA，主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。先将针对IgM的第二抗体（如羊抗人IgMμ链抗体）连接于固相载体，用以结合（“捕获”）样品中所有IgM（特异或非特异），洗涤出去IgG等无关物质，然后加入特异抗原与待检IgM结合；再加入抗原特异的酶标抗体，最后形成固相二抗- IgM-抗原-酶标抗体复合物，加酶底物作用显色后，即可对样品中待检IgM是否存在及其含量进行测定。 免疫荧光技术 免疫荧光技术 基本原理： 免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光（黄绿色或橘红色），可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。 方法分类 直接法 间接法 补体法 直接法 免疫传感器技术 免疫传感器技术是将免疫测定技术和传感器技术相结合的一类新型生物传感器，该技术具有精确度、灵敏度高、特异性强、样品前处理简单的特点。其选择性好、操作简单、携带方便、能重复利用，并能实现现场检测盒在线检测等优点，有望成为食品安全检测中最有效的新技术。