实验一细菌基本检验技术一PPT.pptx

实验一;一、常用消毒灭菌方法介绍;1、干热灭菌 火焰烧灼灭菌 热空气灭菌 160℃-170℃ 2小时 适用于玻璃器皿如吸管和 培养皿等的灭菌 2、湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法 间歇灭菌法 煮沸消毒法;高压蒸汽灭菌法 1.05kg／cm2(15磅/英寸2)，121.3℃保持15-30分钟；0.7kg／cm2(10磅/英寸2)，115.6℃保持20-30分钟； 适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌； 指示菌：菌种采用USP（美国药典）31版和ISO11138（国际标准组织）指定的嗜热脂肪芽孢杆菌（ATCC 7953），本菌芽孢对热的抗力较强，其热死亡时间与病原微生物中抗力最强的肉毒杆菌芽孢相似。 ;间歇灭菌法 阿诺氏流动蒸汽灭菌器进行灭菌； 100℃30分钟 室温下18-24小时 100℃30分钟 室温下18-24小时 100℃30分钟； 有少数培养基例如明胶培养基、牛乳培养基、含糖培养基等用干热灭菌和高压蒸汽灭菌均会受到破坏，则必须用间歇灭菌法。 煮沸消毒法 煮沸消毒时间为10-15分钟； 注射器和解剖器械等可用煮沸消毒法。 ;;四）化学方法 常用化学杀菌剂应用范围和常用浓度表 ;二、微生物实验中常用器材的准备;2、用过的玻璃器材： 凡培养了细菌或污染有活菌的玻璃器皿，均可直接投入5％碳酸氢钠水锅中煮沸30分钟，趁热倒出器皿内的内容物，再用热肥皂水洗刷，最后用自来水冲洗干净。 沾有凡士林或石蜡的器皿，应单独高压灭菌，然后趁热倒出内容物，将试管等倒立于吸水纸上置100℃烤箱内半小时，吸出油污，再放入5％碳酸氢钠水中煮两次，然后用肥皂水洗刷干净，凉干或烤干备用。 ;染有活菌的吸管应投入3％来苏液内浸泡30分钟，再用肥皂水洗涤一次，最后用自来水冲洗干净。 染有活菌的玻片，可浸入3％来苏液或清洁液中过夜，取出后水洗。细菌染色之载玻片放入5％肥皂水中煮沸10分钟，刷洗干净，再清水冲洗，最后浸入95％酒精中片刻，取出软布擦干备用。 ;玻璃器皿的包扎和灭菌 培养皿（简称平皿）： 包扎：培养皿由盖皿和底皿组成，先将盖皿和底皿套合后，数个（10个或15个或随意性）一叠用纸包裹或装在金属的平皿框架内。 灭菌：160℃干热灭菌2小时或高压蒸汽灭菌15磅/寸2灭菌20分钟，再置烤箱内烤干备用。 ;试管： 包扎：培养用的试管，其管口必须用棉塞塞紧。 棉塞制作法：取大小合适的棉花块（视管口口径大小而定），松松地卷成圆筒，将两端毛边略向内折入，再逢腰折转，在折端套一大小合适的纱布块，塞入试管口内，纱布的散端可用线扎紧，剪去须尾。 棉塞的要求： ①、要有适当的长度，2/3塞入试管内，1/3露于管口外； ②、大小适宜，应手持棉塞外露部分时试管不掉离棉塞，同时又能轻轻拔出（过松达不到滤菌的目的，过紧妨碍空气流通）； ;吸管及毛细吸管： 包扎：（管口要求塞棉花）以拇、食指持一端拉直的回形针，并以食指夹取少许棉花（根据吸管孔径大小确定棉花多少），轻轻从管口端塞入1.5～2cm，抽出回形针。塞入的棉花松紧必须适中，过松时使用中棉花容易脱落，过紧时吹吸时流速太慢，管口露出的棉花纤维可在酒精灯火焰上烧去。管口塞好棉花后将吸管尖斜置于一条约4×40cm左右的纸条上，离终端4cm，将纸条包住吸管的尖端向前稍微滚动，使将管尖包裹，再将纸条末端折叠包严吸管尖端，将吸管继续滚动至纸将吸管全部包严。 ;;棉签（棉拭）： 棉签制作：取稍许脱脂棉，做成一定形状置于左手中指上，用一竹签自前向后卷入少许棉花，然后将竹签前端棉花折入，再继续滚动棉签（滚动过程中以食指抵住竹签前端）直至将所取棉花全部卷紧即成。 包扎：取15～20根棉签，用纸包好或插入试管内，塞好棉塞，灭菌备用。 ;三、常用培养基的制备;;四、细菌的接种培养与生长现象观察;;实验方法： 细菌接种与培养方法 1、液体培养基（肉汤）的接种方法：主要用于增菌培养及检测细菌的生化反应 左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌种管与待接种的培养基管使菌种管在外，培养基管位里。 右手拇、食指先转动两管棉塞，以便接种时易于拔取。 右手持接种环，烧灼灭菌，柄部也要迅速通过火焰2~3次杀灭表面的杂菌，灭菌后拿在手中，勿与其它物接触。 ;以右手无名指与小指拔取菌种管棉塞，再用手掌与小指拔取待接种管，随后将两管管口迅速通过火焰灭菌。 用