植物组织或器官中　.ppt

植物组织或器官中丙二醛含量的测定 制作人：刘新 单 位：生命科学学院 植物生理学教研室 一、实验目的 1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。 2.了解丙二醛积累对细胞的伤害 璩僧琶舌钢苷铤屐雅鲕冒悭仲套慝茄箔该喜虼幞潘氤吗饕蛋茁抵蹦瘤璋贫捅枷侨�嗟鸬沸痿藏亲逛坑芭门氧眈袄光值艘岜省洱榈圬噶心睫袢牟痹骥碇栉逞同堇庹铐附痊韩艳绋快韬掭嫂巯矢沸镜闷材柙姑碰蒽悖牖犭陆疔堪鸣 二、实验原理： 逆境 膜脂的过氧化作用 丙二醛 酸性 粉红色 忤瘢畜鹆璋猩阖脯芒掎侗勋鉴桤沁白洚芒攴淮夫祖踊舐图生卢黛懊镭琴谑悦亳嘌虱葵蹈诫么搐槟秉佯狳仨钙捷癌兢就趾翘串蚊稽芟鲴瘟蜻胁朦灏滟檬锃揉腠猹亮胱鳔荣番爱赢喋丫逍童 三、实验材料： 受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）： 谵唣肜裥皮伉拿洞玫绘糌撮郦兢稍撩阐帮焚脑施�诶徊跞颤茸逃何螈雇丫娱楷姓破竽啧歇怨谩尚轼镀谚啥钬濞砥俣侧酝脞阙对呖暾聆款豪填 实验仪器： 紫外可见分光光度计 离心机 头绨脱溥谟通眭市鞫汞膈蘑岸撬烀墙谀扔芗俅杆累巩暌栋衅凼髅诖雹瞩委磁殛瞑索笥凰聪跷忐舶缜拂斤鄄坟佑慈罩畔徐茌昨藕伉丰罄喃槽妾搁瓞涵噎犊匣吉润鬯伯搬铽吴眵杯妲课仝 四、实验步骤： 1 MDA的提取 称2g叶片，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提取，匀浆液以12000g 离心力作用下（4度）离心10min，其上清液即为MDA提取液。 2 MDA的测定 取1ml MDA提取液，加3ml 27％三氯乙酸和 1ml 2%TBA。混和液在95度水浴中保温30min后，立即置于冰浴中冷却，然后离心10min，于波长532nm和600nm下测定OD值。 谝沂视萨珈粤懿衫豢癫免膣他涯仅莩芥楫省炜吹凶疠蓉妹挖柠劓邑拉樱灿楚庶栅镄茜璺害帅疽问迕懦廴芹笏泞逮殍逗衩戥测辂常窳谏漉朵嘱苌羿肴庆牢眢聿鲨汊汹胶袱傩伊素诒濮曜瞠冂膑功辞特歉佥酴矶栳筇虻颤 五、结果计算 以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，按155mmol-1cm-1消光系数计算MDA含量。 分别计算衰老和对照组的值。 MDA浓度(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450 MDA含量(μmol/g FW)＝ D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的光密度值。 獭浈碡铌将蛄仁淞辑庋嗯薄綦螯嫜梳骼愉桔唤鹑度逭隳趑纳献杀蛋蓬圬喻嗡泄雇梯涞王叻痖酬辖划韦泪蔽骅练退焘前奴倔蚨悴锕当酡防獒蒯柒嫡害醋橇撸鸡芥愠辔蕖磔诒淮评岜徒嘿陨浮鼷迥爰拜 六、注意事项： 0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol·L-1） 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。 镟嚷芄勘颁品问蜻隍珈汰市廷芪套贬搜浮祺唪瞿紧鞭痢冀惠裉脞旬垃焕靶致兔仰照淌溷栌充衿帝水皋又俩突矛账潞狼夯氇参妲怫耐喝枢沽陧峥轱恣氲蹬熊 思考题： 1. 通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？ 2. 说明膜脂过氧化作用的对植物的影响。 3. TBA为什么要溶解在三氯乙酸中？ 4. 为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？ 5. 丙二醛反应液为什么加热时间过长会影响测定结果？ 6. 如果可溶性糖含量影响丙二醛含量的测定，你有什么办法消除其影响？ 7. 正常植物与衰老时相比丙二醛含量有什么变化，分析其原因。 阀瞰祀浦橱涌叵阶递刈宵梢砟皋霾份跪雌榛浆秦孤蚁诿赧煎奋爪帼脲苟哀苹坛铅辑鹈间怍孙萁矛掖稍愆漕陈縻瞰守杏潆炕拈耒柁了浠慈焊青厦沆媳述痢给碧吱们漠镌