人工合成细胞工厂–课题.PDF

DNA合成技术及服务介绍 技术支撑中心 田会娟 2016-10-28 主要内容  DNA化学合成原理  引物合成  基因合成 DNA合成-Dr.Oligo192 合成仪 DNA合成-Dr.Oligo192 合成仪 DNA合成-原理 引物化学合成原理 固相亚磷酰胺三酯法： 固相亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成 的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相邻的核苷酸通过3′→5′磷酸二 酯键连接，对此方法的最简单描述是：溶液中的单体通过缩合反应形成3’→5’ 磷酸二酯键，从而连接到固相支持物上。 方法特点： 基本材料： 1.固相合成 2.每一个核苷酸依次连接上去 CPG Frits 3.合成方向是3´-5´ 4.疏水环境中进行 DNA合成-原理 引物化学合成原理 • 脱掉与固相载体相连的寡核苷酸链延伸端碱 1. 脱保护 基5’-OH上的DMT保护基团 • 新的亚磷酰胺碱基单体加成到延伸的寡核苷 2. 活化、偶联 酸链上，得到核苷亚磷酸酯 • 将未成功加成新碱基的寡核苷酸链的5’-OH 3.封闭 加帽封死 ，使其不再进一步参与反应。 • 将核苷亚磷酸酯氧化成更稳定的核苷磷酸酯 4.氧化 （即将三价磷氧化成五价磷） 合成反应按1~4步循环，直至所需的寡核苷酸序列。经 氨解处理后，寡核苷酸产品从固相载体上裂解下来，并 脱掉5 ‘端的保护基团，可进一步进行浓缩、纯化等处理 。 Figure : The phosphoramidite oligonucleotide synthesis cycle DNA合成-引物部分 寡核苷酸（引物）合成 主要优势: 1.采用世界领先的高通量DNA 合成仪Dr.Oligo-192上 机合成，合成速度为5分钟/碱基。 2. 采用优化的氨解、脱保护后处理技术，简化合成 步骤、缩短合成总时长。 3.合成价格为成本价，低于公司市场价 短链引物（＜60 bases） 0.5元/base 长链引物（60 ～80 bases）0.8元/base Dr. Oligo 192 DNA 合成仪 4. 合成周期短 短链引物（40 bases）当日订单，当日可取 长链引物（40 ～80 bases）当日订单，次日可取 5.沟通便捷，取货方式灵活（单次合成量的富余产品 可免费多次发放）。 DNA合成-引物部分 引物合成日常服务 1. 引物合成订购方式 填写“引物合成订购单”（可从内网或群共享中下载） 发送至邮箱oligo_synthesis@tib.cas.cn 2. 引物合成流程 订单处理 0.5 h 订单录入 0.5 h 上机合成 4-7 min/base 下机氨解、洗脱 2.5-5 h 定量、分装 0.5 h 成本抽干 0.5 h 检查发货 DNA合成-引物部分 引物订购注意事项1：引物订购表 注意： 1.姓名； 2.课题组；