[理学]18_高效液相色谱法1.pptVIP

* 方法原理 分离柱，交换反应： 洗脱反应： 抑制柱：与组分反应： 与洗脱剂反应： 低交换容量的阴离子交换剂 高交换容量的阳离子交换剂 * 手性固定相 流动相中加入手性添加剂 用途： 分离、分析立体异构体 (2) 手性色谱法：chiral chromatography, CC * (3)亲和色谱(AC) Affinity chromatography 原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 * (4)排阻色谱 size- exclusion chromatography 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离 * 二、HPLC的固定相和流动相及其选择 * 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N 1. 化学键合固定相： * (1)键合相的种类 非极性键合相 表面为非极性基团，C18，C8，C1，苯基等； 通常用于反相色谱 弱极性键合固定相 醚基和二羟基键合相； 可作为正相或反相色谱固定相，应用较少 极性键合相 氨基、氰基键合相 通常用于正相色谱 * (2)键合相的性质和特点 a. 键合反应 b. 含碳量和覆盖度 存在着双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； * c. 化学键合固定相的特点 （1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱； * 仪器分析 第18章 高效液相色谱法 High performance liquid chromatography; HPLC (1) * 高效液相色谱法的主要类型和原理 高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择 高效液相色谱仪 高效液相色谱分析方法 Introduction * HPLC 以高压输送流动相，采用高效固定相及高灵敏度检测器，发展而成的现代液相色谱分析方法 * 应用颗粒细、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高 流速快，分析速度快 使用高灵敏度检测器，大大提高了灵敏度 与经典液相色谱法相比 * 不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广 可选用不同性质的各种溶剂作为流动相，分离选择性高 一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温 与气相色谱法相比 * 70年代迅速发展 不挥发有机物约占70% 80年代以来HPLC 文献量 21%（89年） 仪器销售量 25%（12 亿）（89年） 应用领域 拓展（化工、环保、临床、药品、生命） 超过 GC * * * * * * 一、高效液相色谱法的主要类型和原理 * 1. 高效液相色谱法的主要类型 按固定相的聚集状态分类 液液色谱法（LLC） 液固色谱法（LSC） 按分离机制分类 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（ion exchange chromatography; IEC） 分子排阻色谱（molecular exclusion chromatography; MEC） * 按分离机制分类（续） 亲和色谱法（affinity chromatography; AC） 手性色谱法（chiral chromatography; CC ） 胶束色谱法（micellar ch