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HPLC系统 仪器 仪器：脱气机 仪器：四元泵 泵的基本原理 仪器：DAD检测器 仪器：手动进样器-六通阀/定量环 仪器：反相柱 仪器：样品过滤 针式过滤器 开机:先开电脑，出现 CAG Bootp Server窗口 开机:双击on line 软件 出现右面/下面窗口 反相HPLC分析抗生素 * * HPLC实验 / 操作步骤 实验内容 报告 仪器 * HPLC实验 / 溶剂传输系统：心脏 高压泵 样品引入系统： 进样器 样品分离系统：关键 色谱柱 信号检测系统： 检测器 数据处理系统： 软件 * HPLC实验 / Agilent 1100 Agilent 1100基本组成 脱气机4元泵DAD检测器手动进样器 * HPLC实验 / 脱气机 在真空室内使用半透膜管路Tubular Plastic Membrane 有效降低噪音 半透膜管 透气不漏液 * HPLC实验 / 不是４个泵／必配真空脱气机／二元泵各控制一种溶剂 四元泵G1311Ａ ＭＧＧＶ在起作用 ＭＧＧＶ：比例阀 ＡＩＶ：　主动阀ＯＢＶ：　单向阀 * HPLC实验 / 往复活塞泵(单向阀) 弹簧隔板/红宝石球 串联柱塞泵 消除流量脉冲 并联柱塞泵 减小流量脉冲 * HPLC实验 / UV/Vis双灯，全波长检测 ＤＡＤ检测器 流路 * HPLC实验 / 六通阀定量环 Load Inject 通废液口 进柱 定量环 自动进样100样品盘/机器手/自动洗针 * HPLC实验 / 色谱柱 最常用：常规分析80% Mobile Phase：水/甲醇/乙腈 柱：C-8/C-18/C-4/C-2 适用：中性/弱酸碱 * HPLC实验 / 针式滤器 0.220.45 0.220.45 0.220.45、0.8 0.220.45、0.8 孔径(μm) 聚醚砜膜 聚四氟乙烯膜 尼龙膜（有机系） 混合纤维素（水系） 滤膜材质 作用：样品预滤、澄清除颗粒、液体和气体的除菌过滤。 是过滤小量样品的首选方法。 外壳材质为聚碳酸酯塑料 上、下部由超声波焊接成一体，耐高压。 某公司生产的针式过滤器规格 HPLC实验 / * HPLC实验 / 操作步骤 实验内容 报告 仪器 * HPLC实验 / 开机:依次开脱气机/四元泵/检测器，窗口出现7行字，通讯成功。 * HPLC实验 / 点击这里的on 系统正常工作 左旋四元泵的 Purge * HPLC实验 / 流动相比例 程序洗脱 泵的设置 * HPLC实验 / 选择波长等 DAD设置 * HPLC实验 / 进样 Purge右旋到位 用专用注射器进样20μl的三倍 系统压力及基线balance后稳定 Inject，开始分离检测 * 实验内容 操作步骤 报告 仪器 HPLC实验 / 测试条件(参数为出厂报告)流动相 ： 80%甲醇/20%纯水柱压 ： 79.3 Bar柱流速 ： 1.00ml/min线性流速 ：0.164cm/sec温度 ：室温（常温23℃）注入体积： 5μl HPLC实验 / 柱效检测 Agilent XDB-C8柱：4.6 ×150mm, 5μm HPLC实验 / 柱效检测 溶剂：与流动相组成相同，甲醇（色谱纯）、高纯水配制成， 甲醇体积分数为75%。 分析对象： 尿嘧啶、苯酚、甲苯、4-氯硝基苯均为分析纯。 四种单组分溶液，及四种物质的混合液 过滤后，进样分析。 尿嘧啶 苯酚 甲苯 4-氯硝基苯 HPLC实验 / 借这组标样，做系列验证性实验 1 不同公司仪器 Varian Prostar 二元泵210/柱温箱 DAD 335/自动进样器410 Agilent 1100 四元泵/DAD 手动进样器20μL定量环 明白各部件及功能 HPLC实验 / 借这组标样，做系列验证性实验 2 改变流动相 甲醇/水 乙腈/水 改变甲醇比例 等度/梯度洗脱 HPLC实验 / 借这组标样，做系列验证性实验 3 不同色谱柱 不同固定相 C8/C18/CN/AqC18/苯基 不同填料粒径 3.5/5 μM 换柱 HPLC实验 / 进样前准备——样品过滤 一次性注射器 针式（头）过滤器 样品瓶 HPLC实验 / 进样针 进样阀，20μl定量环 进样: 留下印象的实验内容 HPLC实验 / 柱效检测 次序：尿嘧啶/苯酚/ 4-氯硝基苯/甲苯 Agilent XDB-C8柱：4.6 ×150mm, 5μm HPLC实验 / 柱效检测 UltimateTM XB-Phenyl(苯基) 4.6 x 150 mm, 5 μm 流动相: 75%甲醇/ 25% 水 流速: 1 ml/min检测波长: 254 nm 温度：室温 * 报告