[研究生入学考试]生物制药 第二章 生物制药技术通论 第四节 酶工程制药技术.pptVIP

第二章 生物制药技术通论 第一节 生物药物的制备技术 第二节 发酵工程制药技术 第三节 细胞工程制药技术 第四节 酶工程制药技术 第五节 基因工程制药技术 第四节 酶工程制药技术 一、酶工程概述 二、酶的固定化技术 三、酶工程制药实用技术 一、酶工程概述（一）酶学基础 1、酶的概念 酶是具有生物催化功能的生物大分子，按照其化学组成，可以分为蛋白类酶（P酶）和核酸类酶（R酶）两大类别。蛋白类酶主要由蛋白质组成，核酸类酶主要由核糖核酸（DNA或RNA）组成。 2、酶的结构 3、酶的特点 （1）催化效率高 （2）专一性强 （3）反应条件温和 （4）酶的活性是受调节控制的 自身调控：生物进化出了一整套完善而有效的调控系统，如激素、神经系统和细胞信号转导途径，它们最终的作用点都是在酶分子上。 环境调控：温、光、水、气、营养等外界因子可以影响到酶的活性。 人工调控：人工加入一些特殊物质调控酶的活性，如激活剂和抑制剂等。 催化效率高 过氧化氢可以在铁离子或过氧化氢酶的催化作用下分解成为氧和水，而过氧化氢酶的催化效率是铁离子的1010倍。 2H2O2 ? 2H2O + O2 用Fe3+催化，效率为6×10-4mol/mol·s 用过氧化氢酶催化，效率为6×106mol/mol·s 效率提高1010倍（100亿） 专一性强 反应条件温和 4、酶促反应动力学 （1）底物浓度：米氏方程 （2）酶浓度 （3）pH （4）温度 （5）产物 （6）抑制剂 （7）激活剂 （二）酶工程概念与内涵 1、概念 酶工程是利用酶所特有的生物催化性能，将酶学理论与化工技术结合而成的一门生物新技术。 酶工程在工业、农业、化工、医药、食品、保健业及环境保护等各方面发挥着越来越重要的作用。 2、酶工程的技术内容 　　⑴天然酶的开发和生产 　　⑵高纯度酶制品生产 　　⑶酶的化学修饰技术 　　⑷酶的固定化（包括细胞的固定化） 　　⑸酶反应器研制与应用 3、酶工程发展阶段 一般认为起始于20世纪中叶的微生物发酵生产酶制剂，并在工业上大规模应用。 到1971年召开第一届酶工程国际学术研讨会，正式统一“固定化酶”（immobilized enzyme）名称，已称为“第二代酶工程”。 所谓第三代酶工程，是以“固定化多酶反应器”为代表的新型酶应用技术。 现在的研究热点是抗体酶、非水介质酶促反应，以及自动化程度更高的酶反应器等研究。 二、酶的固定化技术（一）固定化酶的概念 固定化酶：将酶限制或固定于特定的空间位置，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。 载体：化学惰性物质，不能与酶发生反应，也不能抑制酶活性。 固定化所采用的酶，可以是经提取分离后得到的有一定纯度的酶，也可以是结合在菌体（死细胞）或细胞碎片上的酶或酶系。 固定后酶失去运动的自由，但活性依旧。 （二）固定化酶制备一般原则 1、维持酶的催化活性及专一性。 2、酶和载体要结合牢固。 3、固定化应该有利于生产自动化、连续化。 4、固定化酶应有最小的空间位阻。 5、固定化酶应有最大的稳定性。 6、固定化酶应有廉价的。 （三）酶固定化方法 1．吸附法 2．包埋法 3．结合法 4．交联法 1、吸附法 利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上，而使酶固定化的方法称为物理吸附法，简称吸附法。 物理吸附法常用的固体吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、硅胶等。 离子吸附法是指通过离子效应，将酶分子固定到含有离子交换基团的固相载体上。其载体有阴离子交换剂，如DEAE（二乙氨基乙基）-纤维素、TEAE（四乙氨基乙基）-纤维素、DEAE-葡聚糖凝胶等；阳离子交换剂，如CM-纤维素、Amberlite(G-50、IRC-50、IR-120、Dowex-50)等。 特点：操作简便，条件温和，不会引起酶变性失活，载体廉价易得，而且可反复使用。但由于靠物理吸附作用，结合力较弱，酶与载体结合不牢固而容易脱落，所以使用受到一定的限制。 2、包埋法 将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中，使酶固定化的方法称为包埋法。 凝胶包埋法是将酶或含酶菌体包埋在各种凝胶内部的微孔中，制成一定形状的固定化酶或固定化含酶菌体。常用的凝胶有琼脂凝胶、海藻酸钙凝胶、角叉菜胶、明胶等天然凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶、光交联树脂等合成凝胶。 半透膜包埋法是将酶包埋在由各种高分子聚合物制成的小球内，制成固定化酶。常用于制备固定化酶的半透膜有聚酞胺膜、火棉胶膜等。 特点：酶结合力弱，稳定性较高，包埋材料、包埋方法可选余地大，包埋条件温和；仅可用于低相对分子量的底物，不适用于柱系统，常用扩散限制问题，不是所有单体材料与试剂都适用于各种酶。 3、结合法 选择适宜的载体，通过共价键或离子键与酶结合在一起的固定化方法称为结合法。 离子键结合法：