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微生物的染色和形态观察
一、目的要求 ——学习微生物涂片、染色的基本技术 ——认识细菌和形态特征 ——巩固显微镜(油镜)的使用方法及生物作图要求 二、基本原理 三、器材: ——菌种:分离纯化的菌株、枯草芽孢杆菌 ——试剂:结晶紫染液 ——其他器皿及用具:显微镜等 操作步骤 一、涂片: ——无菌操作 ——滴的生理盐水的量不能太多 ——菌不能加太多,涂布要均匀 操作步骤 二、干燥和固定 三、染色 四、水洗 五、干燥:不能擦 操作步骤 六、镜检 ——必须完全干燥后才能用油镜观察 ★油镜使用原理及注意事项 操作步骤 操作步骤 1、低倍镜观察(寻找观察目标)。 2、高倍镜观察(选取理想的观察目标)。 3、油镜观察:高倍镜观察后- 上升镜筒-油镜转至正下方,在载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗螺旋将镜筒缓慢上升,寻找目标(物象)用细螺旋调节,使物象清晰-观察记录。最大光圈 操作步骤 4、观察完毕。上升镜筒,转动物镜转换器,使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹,再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油,最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。 5、将显微镜各部分还原,放回箱中。 结果与分析 ★结果 ——根据观察结果,绘细菌形态作图 思考题 (1)为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察? (2)如果涂片未经热固定会出现什么问题?如果加热温度过高、时间过长又会如何? 下一个实验 细菌的革兰氏染色和芽孢染色 * * 微生物的染色和形态观察 ——细菌的简单染色法 基本原理 ★细菌个体微小,且较透明,必须借助染色法使菌体着色,与背景形成鲜明的对比,以便在显微镜下进行观察。 ★根据实验目的不同,可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。 ★简单染色法是最基本的染色方法,是利用单一染料对细菌进行染色。此法操作简便,适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 基本原理 ★常用碱性染料进行简单染色,因为细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离时其分子的染色部份带正电荷,易与细菌结合使细菌着色。 滴加少量水 挑取菌体 涂片
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