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上海美吉生物医药科技有限公司 资料 技术简介 GS FLX 系统超高通量测序技术原理 GS FLX 系统的测序原理是一种依靠生物发光进行DNA 序列分析的新技术；在DNA 聚 合酶，ATP 硫酸化酶，荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下，将引物上每一个dNTP 的聚合与 一次荧光信号释放偶联起来 (图 1)。通过检测荧光信号释放的有无和强度，就可以达到实 时测定 DNA 序列的目的。此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针，也不需要进行电泳； 具有分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化的特点. 图1：GS FLX 高通量测序方法原理示意图 上海美吉生物医药科技有限公司 资料 GS FLX 系统的操作过程 1）样品种类：GS FLX 系统支持各种不同来源的样品序列测定：包括基因组DNA， PCR 产物，BAC，cDNA，小分子RNA 等等。 2）样品DNA 打断：样品例如基因组DNA 或者BAC 等被打断成300－800 bp 的 片段；对于小分子的非编码RNA，这一步骤则不需要。短的PCR 产物则可以利 用GS 融合引物进行扩增后直接进行步骤4)的工作。 3）衔接子连接：借助一系列标准的分子生物学技术，将A 和B 接头（3’和5’ 端具有特异性）连接到DNA 片段上。接头也将在后继的纯化，扩增和测序步骤 中用到。图中仅仅显示了后续步骤中要用到的单链的DNA 片段 4）一条DNA 片段＝一个磁珠：接头使成百上千条DNA 片段结合到它们自己唯 一的磁珠上，此磁珠被单个油水混合小滴包被后，在这个小滴里进行独立的扩 增，而没有其他的竞争性或者污染性序列的影响；整个DNA 片段进行平行扩增。 5）一个磁珠＝一条读长：经过PCR 扩增后，每个磁珠上的DNA 片段拥有了成 千上万个相同的拷贝。经过富集以后，这些片段仍然和磁珠结合在一起，随后 就可以放入到PicoTiterPlate 板中供后继测序使用了。 6）数据读取和分析工具：GS FLX 系统 在10 小时的运行当中可获得10 多万 个读长，读取超过1 亿个碱基信息。GS FLX 系统提供三种不同的生物信息学 工具对测序数据进行分析，适用于不同的应用：例如多达3 GB 序列的重测序， 对比已知参考序列进行的扩增产物差异分析，及 120 MB 的从头测序工作等。 上海美吉生物医药科技有限公司 资料 GS FLX 系统的技术优势 GS FLX 系统具备的卓越性能： 1. 一个测序反应耗时10个小时，获得超过4 亿个的碱基数据 2. 单个序列的读长更长，平均可达到350－500 碱基左右 3. 通量更高，每个反应可以得到超过100万个序列读长，成本大大降低 4. 读长超过350 bp 时，单一读长的准确性可以超过99.5% 5. 测序结果一致性超过99.99% 6. 技术成熟，提供完整的解决方案 上海美吉生物医药科技有限公司 资料 GS FLX 系统的应用 一、 全基因组测序 1. 多达120 Mb 的未知基因组的测序 1) 生成基因组结构概图 2) 研究DNA 序列的组织，分布和信息 3) 基因筛查：寻找新基因，定位和功能 4) 和其他基因组进行比较研究 2. 全基因组进行从头鸟枪法测序，例如微生物基因，BAC 和YAC 克隆测序。 3. 比较基因组研究 1) 识别单碱基突变 2) 识别突变热点和保守区域 3) 识别插入或者缺失的基因 4) 断定基因型和表型之间的相关关系（比如，研究药物抗性的遗传基础）