[高二理化生]ly11 DNA重组技术的基本工具.ppt

1．下列四个DNA分子片段，彼此间具有互补黏性末端的一组是（ ） A．①② B．②③ C．③④ D．②④ 练习 B 2、（双选）下列关于限制酶的说法不正确的是（ ） A. 限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很少分布 B. 自然界中限制酶的天然作用是用来提取目的基因 C. 不同的限制酶切割的切点不同 D．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 AB 3、图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是（ ） A. ①②③④ B. ①②④③ C. ①④②③ D. ①④③② C 4、限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamH I，EcoR I，Hind Ⅲ以及Bgl Ⅱ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？（ ） A. BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT— B. BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC— C. EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT— D. BamHI和BglII；末端互补序列—GATC— D DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ── “分子缝合针” ── “分子运输车” ── 限制酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 课本知识回顾 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 原核生物中分离纯化出来 特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 平末端 二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 基础上进行过 的 质粒 λ噬菌体衍生物 动植物病毒 天然质粒 人工改造 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 转鱼抗寒基因的番茄 基因工程： 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工，因此叫做DNA的重组技术。 注：基因工程能定向改造生物的遗传性状 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质（原理） 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 (人工）基因重组 转基因抗虫棉 抗虫棉 普通棉 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 1.1 DNA重组技术的基本工具： 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 2、DNA连接酶—— “分子缝合针” 3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1、限制性核酸内切酶 2 特点： 识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，在特定的位点切割（特异性）。 1 分布： 主要在原核生物中 限制酶所识别的序列有什么特点？ 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 限制酶识别序列的中轴线 3 结果： 打开磷酸二酯键，产生黏性末端或平末端。 磷酸二酯键 G 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 EcoR Ⅰ 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴