习以为常的智慧结晶－细胞显微技术-岑祥.PDFVIP

撰文: 劉璿 晶 結 慧 智 的 常 為 以 習 習以為常的智慧結晶－細胞顯微技術 ︱ 術 技 微 顯 胞 細 　培養細胞時我們每天都使用的顯微鏡，似乎是再平常不過的基本配備，但您知道嗎？其中許多的技術在 過去曾經撼動整個世界，本篇將以常見的細胞用顯微鏡為例，一一細數其中包含的智慧結晶。 　最早的顯微鏡可追溯到 16 世紀，而奠定現代顯微鏡基礎 的則是我們耳熟能詳的虎克(Robert Hook)，他在17世紀60 年代創造了一台近似現代構造的顯微鏡(圖一)；隨後李文霍 克(Van leeuwenhoek)運用此技術首次觀察到了微生物，使 西 方 醫 學 在 此 之 後 突 飛 猛 進 ； 而 1 8 9 3 年 克 勒 ( A u g u s t Kohler)運用光圈與透鏡的組合使燈源均勻並聚焦於樣本上， 日後稱此技術為克勒式照明；光學顯微鏡至此大抵定形。 　其中有一段較少被提到卻對細胞顯微技術相當重要－倒立 顯微鏡的發明，1850年史密斯(J. Lawrence Smith)將燈源與 物鏡位置對調，使載台能有更多空間放樣本，大幅改進傳統 正立顯微鏡可接受樣本厚度的限制(圖二)；時至今日，倒立顯 微鏡使我們能將培養皿(dish)或培養瓶(flask)放上載台，搭配 長工作距離物鏡(Long working distance objectives)則能穿 透塑膠容器壁，聚焦於容器中；但早在20世紀初細胞培養技 術蓬勃發展之前人們就已經注意到了一個問題：顯微鏡很難 看到透明的物體。 圖一、上：虎克顯微鏡手稿。下：以 虎克顯微鏡所觀察到的植物細胞壁 。 圖二、標準倒立顯微鏡。 岑祥股份有限公司 .tw 台北 02-2785-1156 新竹 03-530-7592 台中 04-2471-0255 高雄 07-343-1735 9 　　我們經常認為顯微鏡能看見細胞是理所當然的，但如同上文所述，對於100年前的科學家來說，要看見 晶 結 慧 智 的 常 為 以 習 透明的細胞是不可能的任務。1932年，一項革命性技術的出現克服了此一困難－相位差系統(Phase Contrast)。此技術由荷蘭物理學家賽諾克 (Frits Zernike) 所發明，利用光源前方的環狀光閘 (condenser annulus)製造空錐形光源，搭配物鏡內的相位差環 (phase shifting ring) 改變光波的相位 (phase)，提高樣 本不同結構間的對比度 (contrast)，使未經染色的透明樣本如細胞也變得清晰可見(如今多以相位差板代稱環 形光閘)。裝置雖然簡單，但其中的原理絕對可稱為智慧的結晶：光在穿透結構不同的透明樣本時，小部分 ︱ 成為折射光，相位發生偏轉，但此過程光強度改變不大，難以被人眼偵測，因此很難在傳統光學顯微鏡中分 術 技 微 顯 胞 細 辨透明樣本與背景；此時可選擇將以相位差板偏轉背景光，使其與折射光重合，造成樣本較背景更明亮，進 而能以明暗分辨，稱為明相差 (Bright Cont