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血液病染色体检验blood disease chromosome analysis 长医检验系 郭旭霞 染色体检查chromosome malformation 血液病与染色体异常blood disease and chromosome abnormality 第一节 染色体检查 chromosome check-up 染色体特征及命名 研究人类染色体的常用技术 染色体畸变 染色体特征及命名 chromosome character and name 每个中期分裂相中含有的46条染色体可以配成23对 每一中期染色体中包含二条DNA分子，构成中期染色体的两条单体互称为姐妹染色单体(sister chromatid)，它们仅以着丝粒(centromere)处相连。 以着丝粒为界，染色体可分为长臂(q)和短臂(p)两个部分 以着丝粒存在位置为标准，可将染色体分成三类：中着丝粒染色体 ；亚中着丝粒染色体和近端着丝粒染色体。 染色体分组和命名 chromosome group and names 人类正常有46条染色体 ，同源染色体互相配对成23对，根据其大小，着丝粒位置，臂率等形态特征，将其分为7个组(A、B、C、D、E、F、G等)。第1—22对为常染色体(autochromosome)，另一对与性别决定有关，称为性染色体(sex chromosome)，人们按形态将X染色体归于C组，将Y染色体归于G组。 人类染色体的分组及形态特征 染色体核型chromosome caryomorphism 1.核型分析karyotype analysis ? 拷图 二.研究人类染色体的常用技术 chromosome studying technique (一) 人类染色体标本制备及分析技术简介 (二) 显带技术 (三) 染色体荧光原位杂交技术 (四) 分子生物学技术 (一) 人类染色体标本制备及分析技术简介 1.血细胞和骨髓细胞(外周血淋巴细胞和血液病血细胞或骨髓细胞培养)染色体标本制备方法 2.羊水细胞培养和染色体制备 3.绒毛细胞培养和染色体制备 血、骨髓细胞染色体分析Blood cell and bone marrow cell chromosome analysis 标本制备原则chromosome sample making principle 除肿瘤细胞外，对普通细胞应用促有丝分裂原（如植物血凝素PHA），使细胞从静止状态被激活，进入旺盛的分裂增殖状态，加入有丝分裂阻断剂（通常使用秋水仙素colchicine，抑制纺锤丝形成），使细胞都停止于有丝分裂中期，低渗处理使细胞膨胀，染色体更好地分散，固定、滴片和染色后，镜下计数并分析核型。 染色体标本制备方法：chromosome sample making method 取材draw materials 接种inoculation 培养culture 制片make slide 染色dye １．取材 draw materials 通常取骨髓bone marrow，当外周血白细胞数在30×109/L以上且早、中幼粒细胞在3%以上时也可取静脉血培养。 ２．接种 inoculation 将取材的骨髓液或血液接种于1640培养液中，接种量依有核细胞数量而定，使有核细胞在培养液中的量为1—2×106/L ３．培养 culture 常用的培养方法有四种：普通培养法、短期培养法、直接制片法和5氟脱氧尿嘧啶核苷（5-Fluorodexyuridine）（5--Fdu）同步化法。 常用的培养方法common culture method ①普通培养法(淋巴细胞培养法)：静脉血加植物血球凝集素（PHA），37℃培养72小时，常规制片，适用于遗传性疾病。 常用的培养方法common culture method ② 短期培养法（适用于急非淋、慢粒、骨髓增生异常综合症）取骨髓液按1—2×106/ml注入培养液，37℃培养48小时，收获、制片，于制片前5小时加秋水仙素，终浓度为0.006—0.0075ng/ml，常规制片 常用的培养方法common culture method ③直接制片法：5×106/ml接种于1640培养液中，加秋水仙胺，终浓度量0.04ug/ml，37℃孵育30分钟，按常规法制片（详见后）。 ④ 5—Fdu同步化法：（适用于急非淋、骨髓增生异常综合症、慢粒，该方法可制备高分辨显带染色体标本） ４．制片 make slide ①离心处理：培养物混匀后移入离心管，1200—1500r/min，离心10分钟，弃上清液。 ②低渗hyp